海參巖藻聚糖硫酸酯酶產(chǎn)生菌的篩選鑒定、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、本文以海地瓜巖藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)為誘導(dǎo)底物,從山東威海好當(dāng)家集團(tuán)的參池底泥中篩選得到一株能夠有效的利用海參巖藻聚糖硫酸酯并分泌巖藻聚糖硫酸酯酶的海洋細(xì)菌,經(jīng)鑒定為革蘭氏陰性菌,16S rDNA分析確定為黃桿菌科細(xì)菌,并將其命名為Flavobacteriaceae.sp HDJ3,簡稱HDJ3。
　　 證實(shí)了HDJ3的產(chǎn)酶實(shí)力后,選擇DNS法這種最為經(jīng)典的還原糖的檢測方法對其所產(chǎn)的酶活力進(jìn)行定量。
　　 為提高該

2、細(xì)菌的產(chǎn)酶活力,通過單因素-響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)對其產(chǎn)海參巖藻聚糖硫酸酯酶的培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化,得出其最佳培養(yǎng)基組成為(w/v):海參巖藻聚糖硫酸酯0.28％,酵母粉0.09％,NaCl2.09％,MgSO40.1％,CaCl20.02％,FeSO40.002％,K2HPO40.02％。單因素試驗(yàn)確定了該菌株的最佳培養(yǎng)條件為:起始pH為7.5,500mL的三角瓶裝液200mL,溫度為25℃,轉(zhuǎn)速150rpm,發(fā)酵時(shí)間為36h。優(yōu)化后,海參巖藻聚糖

3、硫酸酯酶活力為21.67U/mL,比優(yōu)化前提高了3.43倍。
　　 HDJ3能夠穩(wěn)定的產(chǎn)生海參巖藻聚糖硫酸酯酶,該酶主要分泌于HDJ3的細(xì)胞內(nèi)。在溫度25℃,pH7.5條件下發(fā)酵36h后,發(fā)酵液經(jīng)離心、超聲波破碎、超濾濃縮除鹽、Q-sephaorse Fast Flow陰離子交換層析后得到少量的粗分離后的酶,并對該樣品進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)的研究,經(jīng)過實(shí)驗(yàn)確定了酶的最適反應(yīng)溫度是30℃,最適反應(yīng)pH是7.5。酶在0-4℃時(shí)較穩(wěn)定,在4℃

4、,放置24h后酶活剩余80.56％;但熱穩(wěn)定性不高,20℃3時(shí)保溫24h后酶活剩余47.44％。酶的pH穩(wěn)定性范圍為pH7.0-8.0。當(dāng)?shù)孜镏新然c濃度大于3％時(shí)酶活性較高。當(dāng)離子濃度為0.1mmol/L時(shí),NH4+、Ba2+、Ca2+、Li2+、Mg2+離子對酶反應(yīng)的作用不明顯;Mn2+、K+、Ni2+有一定的抑制作用;Zn2+、Cu2+、Fe2+、Al3+表現(xiàn)為明顯的抑制作用,分別使酶活下降了32.27％、54.22％、51.65