高活性纖溶酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化研究.pdf

1、血栓性疾病是目前臨床上死亡率最高的疾病，尋找高效、安全的溶血栓藥物一直是世界醫(yī)藥行業(yè)關(guān)注的熱點(diǎn)。溶栓療法是這類疾病重要的治療方法之一，由于現(xiàn)用溶栓藥物或多或少都存在一些缺陷，因此人們一直都在研制開(kāi)發(fā)新型的溶血栓藥物。本實(shí)驗(yàn)采用自行改進(jìn)的篩選方法，從河北采集的220份試樣中篩選分離到兩株具有產(chǎn)高活性纖溶酶的優(yōu)勢(shì)菌株，系統(tǒng)的優(yōu)化了兩菌株產(chǎn)纖溶酶液體發(fā)酵條件(培養(yǎng)基、接種量、菌齡、pH、溶氧量、營(yíng)養(yǎng)、時(shí)間、搖床轉(zhuǎn)速等)，確定了最適液態(tài)發(fā)酵條件

2、及粗酶活力，并對(duì)這兩菌株進(jìn)行了屬的鑒定。 1.采用酪蛋白平板進(jìn)行初篩，纖維蛋白原平板進(jìn)行復(fù)篩，進(jìn)一步確定纖溶酶產(chǎn)生菌的產(chǎn)酶活性高低。通過(guò)初篩、復(fù)篩、酶活性初步測(cè)定、體外溶栓實(shí)驗(yàn)，確定了HF1、HF3為供試目的菌株。這樣可定向地篩選纖溶酶產(chǎn)生菌，并且測(cè)定了體外溶栓效果，為該酶的尋找建立了一套簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的篩選方法。并為進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)溶栓實(shí)驗(yàn)，開(kāi)發(fā)成為溶栓類藥物提供了有用的參數(shù)。 2.利用單因素實(shí)驗(yàn)和正交分析方法相結(jié)

3、合，對(duì)HF1、HF3兩菌株產(chǎn)纖溶酶液體發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，得出如下結(jié)果： (1)HF1菌株：木糖2％，大豆蛋白胨3％，Na2HPO4：NaH2PO4(％)0.1：0.1，MgSO40.05％，CaCl20.02％、吐溫400.2％。種齡14h，接種量2％，發(fā)酵周期3天，起始pH7.0，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，溶氧量50mL/500mL，發(fā)酵溫度37℃，發(fā)酵液纖溶活性高達(dá)864.9(尿激酶IU/mL)。 (2)HF3菌株

4、：木糖2％、大豆蛋白胨3％、Na2HPO4：NaH2PO4(％)0.1：0.1，MgSO40.1％，CaCl20.01％，吐溫400.2％。種齡18h，接種量2％，發(fā)酵周期3天，起始pH7.0，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，溶氧量50mL/500mL，發(fā)酵溫度37℃，發(fā)酵液纖溶活性高達(dá)862.2(尿激酶IU/mL)。 (3)以上兩菌株酶活力與國(guó)內(nèi)外同類研究對(duì)比，纖溶活性是比較高的。 3.通過(guò)形態(tài)特征觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)及G+C