枯草芽孢桿菌nja133的抗生素抗性選育及肉品應用研究.pdf

1、核糖體工程技術(shù)是近年來深受關(guān)注的菌株選育新方法，該技術(shù)簡單易行、組合方便，在工業(yè)微生物育種方面有良好的應用前景。本實驗室前期研究分離到一株可產(chǎn)生抗微生物脂肽的枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilisnja133），其發(fā)酵產(chǎn)物對冷卻肉的主要腐敗菌假單胞菌（Pseudomonassp.）具有顯著的抑菌活性。本文主要運用核糖體工程技術(shù)對Bacillussubtilisnja133進行菌種改良以獲得抗菌物質(zhì)高產(chǎn)菌，并對高產(chǎn)菌發(fā)酵條件進行優(yōu)

2、化及其生物效價測定，進一步將抗菌物質(zhì)應用于冷卻肉的防腐保鮮，主要得到以下研究成果:
　　 1.本研究根據(jù)核糖體工程技術(shù)原理，用鏈霉素、卡那霉素、氯霉素、利福平、慶大霉素等五種抗生素對該菌株進行處理和選育，采用抑菌圈法評估菌株的抗菌物質(zhì)產(chǎn)量高低。通過鏈霉素處理得到菌株nja717，抑菌圈較野生菌提高了17.59％;在此基礎(chǔ)上，利用卡那霉素處理得到菌株K1-24，其抑菌圈較nja717提高了19.70％;最后對菌株K1-24進行組合

3、抗生素選育;經(jīng)過三輪抗生素抗性選育，最終得到抑菌物質(zhì)高產(chǎn)菌株BacillussubtilisA1B2-2，其抑圈效果較出發(fā)菌株提高了35.27％。
　　 2.枯草芽孢桿菌A1B2-2搖瓶發(fā)酵條件研究表明，在初始培養(yǎng)基中添加碳源玉米粉、糖蜜和鼠李糖以及氮源中的黃豆粉和牛肉膏對菌株產(chǎn)抗菌物質(zhì)具有一定的促進作用，添加金屬離子Mg2+、Mn2+、Ca+和K+同樣促進抗菌物質(zhì)的產(chǎn)生。而碳源果糖、氮源尿素和金屬離子Fe3+、Cu+、Zn2+

4、和Co2+等則對菌株發(fā)酵有一定的抑制作用?？莶菅挎邨U菌A1B2-2的最適發(fā)酵條件為初始培養(yǎng)基pH7.0，接種量2％，裝液量100mL，溫度33℃，培養(yǎng)時間26h。
　　 以假單胞菌為指示菌測定慶大霉素的效價，推算得出枯草芽孢桿菌產(chǎn)抗菌物質(zhì)的生物效價。慶大霉素的效價標準曲線為y=0.0828x-0.7218，R2=0.9955，其工作范圍為2.46～11.72U/mL。應用于冷卻肉保鮮試驗中的抗菌物質(zhì)生物效價為280U/mL。