低濃度毒死蜱對(duì)小鼠胚胎端細(xì)胞體外培養(yǎng)及遠(yuǎn)期空間記憶的影響.pdf

1、毒死蜱(Chlorpyrifos,CPF)作為一種高效廣譜中等毒性的有機(jī)磷農(nóng)藥,已成為目前使用最普遍的農(nóng)藥之一,其亞中毒閾劑量不會(huì)引起明顯的臨床癥狀,但可能影響機(jī)體的神經(jīng)發(fā)育,尤其是在胚胎期和幼年期。本研究主要的目的是了解低濃度毒死蜱對(duì)小鼠胚胎端腦細(xì)胞培養(yǎng)的影響及對(duì)胎鼠遠(yuǎn)期空間記憶能力的損傷。
　　 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括:
　　 (1)體外實(shí)驗(yàn)分析CPF對(duì)小鼠胚胎端腦細(xì)胞培養(yǎng)的影響。取E14天妊娠母鼠,剝離胚胎取胎鼠端腦細(xì)胞進(jìn)行

2、原代培養(yǎng),培養(yǎng)基中設(shè)置OμM、5μM、10μM、20μM、30μM、50μM、100μM和200μM8個(gè)CPF濃度梯度,觀察CPF濃度對(duì)端腦細(xì)胞神經(jīng)球生長(zhǎng)的影響;
　　 (2)培養(yǎng)24hr、48hr后收集原代培養(yǎng)端腦細(xì)胞,制備成單細(xì)胞懸液,乙醇固定PI染色后利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其細(xì)胞凋亡情況;
　　 (3)妊娠母鼠在E13-E17連續(xù)皮下注射5mg/(kg·d)CPF,子代鼠在出生后80天按雌雄性別分為control和5m

3、g/(kg·d)劑量共四組,進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),統(tǒng)計(jì)訓(xùn)練期和測(cè)試期雌雄小鼠找到平臺(tái)的時(shí)間,統(tǒng)計(jì)分析CPF對(duì)小鼠的空間記憶能力的影響及性別差異。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 (1)體外培養(yǎng)E14胎鼠端腦細(xì)胞24hr后,神經(jīng)前體細(xì)胞聚集形成神經(jīng)球。在0-30μMCPF濃度中,神經(jīng)球外圍細(xì)胞大小較均勻,折光性好,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,多個(gè)大小不等的神經(jīng)球集結(jié)成團(tuán)或片;50μMCPF組神經(jīng)球數(shù)開始減少,而100μM和200μMCPF

4、處理組中極少出現(xiàn)此類神經(jīng)球,細(xì)胞幾乎仍保持單個(gè)散在細(xì)胞狀態(tài),并從50μM濃度開始出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。培養(yǎng)48hr凋亡細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步增加;
　　 (2)對(duì)照組雄性小鼠比雌性小鼠能夠更快地找到隱藏平臺(tái),但隨著訓(xùn)練的重復(fù),無論雄性還是雌性小鼠均能達(dá)到相同的記憶效果;在CPF處理組,雄性小鼠與雌性小鼠同樣具有性別差異,雄性CPF組小鼠比對(duì)照組在訓(xùn)練開始時(shí)需要更多的時(shí)間找到隱藏平臺(tái),隨著訓(xùn)練的重復(fù),逐漸達(dá)到相同的記憶效果,而雌性CPF組小鼠