不同干燥方法對ACE活性抑制肽的影響.pdf

1、高血壓是危害人類健康的主要疾病之一，經(jīng)過水解后的酪蛋白可以產(chǎn)生具有降血壓作用的功能性多肽片段。本文通過冷凍干燥、噴霧干燥和流化床干燥處理酪蛋白水解物，探究不同干燥方式對水解物ACE活性抑制作用的影響。
　　研究過程中，采用先胃蛋白酶水解，再用胰蛋白酶水解的方法，獲得具有ACE抑制肽的水解物，利用高壓液相色譜法檢測水解物中ACE的含量，用分光光度法檢測水解產(chǎn)物半數(shù)抑制率(IC50值);采用冷凍干燥、噴霧干燥和流化床干燥的方法干燥水解

2、產(chǎn)物。獲得的水解產(chǎn)物采用原發(fā)性高血壓大鼠（SHR）進行降高血壓效果評價。
　　在水解條件確定研究中，酪蛋白經(jīng)過胃蛋白酶水解3h，再用胰蛋白酶分別依次水解0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h后，用風(fēng)味蛋白酶脫苦處理3h，再經(jīng)過陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂脫鹽處理后，冷凍干燥，用反相高效液相色譜法定量測定各水解物中所含ACE抑制肽YQKFPQYLQY和YS的含量，并用體外檢測ACE抑制活性的方法測定各水解物的降壓活性。結(jié)果表明:

3、標(biāo)準(zhǔn)品十肽YQKFPQYLQY和二肽YS的IC50值分別為11.75、11.89μg/mL;各種水解產(chǎn)物中的十肽含量都在5％左右;二肽含量依次分別為(0.150±0.005)、(0.266±0.039)、(0.214±0.009)、(1.190±0.045)、(1.028±0.117)、(5.277±0.639)、(4.547±0.255)％;水解物的IC50值依次分別為0.256、0.352、0.489、0.507、0.449、0.3

4、08、0.275 mg/mL。因此，酪蛋白雙酶水解條件確定為:先用胃蛋白酶水解3h，再用胰蛋白酶水解3h。
　　在噴霧干燥和流化床干燥研究中，以最終產(chǎn)物的含水量（低于5％）為指標(biāo)，篩選含水量在5％以下的噴霧干燥和流化床干燥產(chǎn)物。通過體外檢測ACE抑制活性的方法，研究噴霧干燥和流化床干燥的不同條件對酪蛋白水解物降壓活性的影響。噴霧干燥選取進風(fēng)溫度、出風(fēng)溫度、蠕動泵轉(zhuǎn)速為考察因素;流化床干燥選取進風(fēng)溫度、進料量、介質(zhì)乳清蛋白粉的添加量

5、為考察因素。結(jié)果表明:在噴霧干燥時，當(dāng)進風(fēng)溫度190℃、出風(fēng)溫度75℃、蠕動泵轉(zhuǎn)速44r/min時，所得產(chǎn)物的ACE活性抑制作用最好，IC50為0.442 mg/mL，含水量為(3.85±0.04)％;用流化床干燥時，進風(fēng)溫度65℃、進料量180mL、介質(zhì)乳清蛋白粉添加量30g時，所得產(chǎn)物的ACE活性抑制作用最好，IC50為0.294 mg/mL，含水量為（4.49±0.13）％。冷凍干燥產(chǎn)物的IC50為0.275 mg/mL，含水量為

6、（1.68±0.28）％。
　　在動物體內(nèi)實驗中，分別用冷凍干燥、噴霧干燥和流化床干燥的產(chǎn)物灌胃SHR，灌胃的低、中、高劑量分別為10、30、90mg/(kg mb)，測定在灌胃后1-8h內(nèi)大鼠尾動脈收縮壓(SBP)的變化。結(jié)果表明:低、中、高劑量的冷凍干燥產(chǎn)物可降低SHR鼠收縮壓分別為(16.6±2.7)、(27.5±7.4)、(35.3±5.1)mmHg;低、中、高劑量的噴霧干燥產(chǎn)物可降低SHR鼠收縮壓分別為（95±2.7）、

7、(18.1±32)、(20.0±3.0) mmHg;低、中、高劑量的流化床干燥產(chǎn)物可降低SHR鼠收縮壓分別為(11.8±3.6)、(25.7±6.7)、(29.2±7.0)mmHg。
　　在雙酶水解制備富含ACE抑制肽的過程中，胃蛋白酶水解主要產(chǎn)生十肽(YQKFPQYLQY)，胰蛋白酶水解主要產(chǎn)生二肽(YS)且水解物的IC50值隨水解進程而變化;干燥方法對水解物的ACE活性抑制作用有影響，產(chǎn)物活性由高到低的干燥方法為冷凍干燥、流化