牡蠣ACE抑制肽的分離鑒定及性質(zhì)研究.pdf

1、牡蠣，海洋生物，營養(yǎng)豐富，含有較多種活性成分。本論文將牡蠣作為研究原料，從血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）抑制肽的制備、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定和性質(zhì)研究共四個(gè)方面進(jìn)行研究，主要研究結(jié)果如下：
　　(1)制備牡蠣酶解ACE抑制肽的工藝優(yōu)化過程中，主要選用馬尿酸法，測定牡蠣酶解產(chǎn)物對(duì)ACE酶的抑制率。以ACE抑制率和水解度為指標(biāo)，對(duì)比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶這5種蛋白酶對(duì)牡蠣肉的酶解效果，選出木瓜蛋白酶最佳。通過單

2、因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳酶解工藝為料液比1:8（m/v）、加酶量2.0％、溫度65℃、時(shí)間1.0h、pH6.0，當(dāng)樣品濃度為5mg/mL時(shí)，酶解產(chǎn)物的ACE抑制率可達(dá)到63.30%。
　　(2)在酶解基礎(chǔ)上采用Plastein反應(yīng)對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行修飾，以游離氨基酸減少量和ACE抑制率為指標(biāo)，考察反應(yīng)過程中酶的種類、底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)、加酶量、時(shí)間和溫度對(duì)修飾結(jié)果產(chǎn)生的影響。通過該反應(yīng)的修飾，得到的最佳條件為中性蛋白酶

3、，底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)40%、加酶量1.0%、溫度30℃、時(shí)間2.5h、pH7.0，當(dāng)樣品濃度為5mg/mL時(shí)，ACE抑制率最高可達(dá)82.31%，比修飾前提高了19%。
　　(3)采用超濾技術(shù)、Sephadex LH-20凝膠層析柱對(duì)牡蠣ACE抑制肽進(jìn)行初步分離純化。借用HPLC系統(tǒng)對(duì)酶解液中的ACE抑制肽進(jìn)一步分離純化。經(jīng)過超濾之后的牡蠣酶解液共分成四個(gè)組分，其中質(zhì)量小于3kDa且經(jīng)冷凍干燥部分的ACE抑制活性最高，質(zhì)量濃度為5mg/m

4、L時(shí)抑制率為64.4%。將分子量小于3kDa牡蠣蛋白水解產(chǎn)物采用Sephadex LH-20凝膠層析柱繼續(xù)進(jìn)行分離，其中F2和F5組分的ACE抑制活性較高，當(dāng)樣品濃度為3mg/mL時(shí)，分別可達(dá)78.9%和76.7%。F2經(jīng)過半制備RP-HPLC的分析，純化出四個(gè)組分，樣品濃度為3mg/mL時(shí)，抑制率最高為54.89%。對(duì)F5直接進(jìn)行質(zhì)譜分析，共得到168個(gè)肽段，經(jīng)過篩選，選出七條可能具有較高活性的肽段，分別為FYYDGKVVKLSEPA

5、EEVA、GFLFLQCGLTL、VSLSGFQYSGFL、MDFSPDGTKVA、KYDISYIVNSVL、SKLMVTEIRRRASNQSTEAA、WMPYFGPFM，具體的ACE抑制活性有待進(jìn)一步確定。(4)體外模擬胃腸液消化結(jié)果表明，分子量小于3kDa的牡蠣肽消化穩(wěn)定性好，生物活性無明顯影響。乳化性在20cm2/g以上，pH為5和10時(shí)乳化穩(wěn)定性好。此外，吸水性為：0.35g/g，吸油性為：0.74g/g，其吸油能力比吸水能力強(qiáng)