高產(chǎn)蝦青素的紅發(fā)夫酵母菌株進(jìn)化工程研究.pdf

1、蝦青素是一種類胡蘿卜素，是一種極強(qiáng)的抗氧化劑，能夠高效率的淬滅活性氧，從而避免活性氧破壞生物體，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、養(yǎng)殖業(yè)等方面。紅法夫酵母是生產(chǎn)蝦青素的優(yōu)良菌種，具有發(fā)酵周期短，易于實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng)等特點(diǎn)。本文利用進(jìn)化工程的方法對(duì)紅法夫酵母進(jìn)行育種，篩選高產(chǎn)菌株。
　　 本課題采用紅法夫酵母野生菌株As2.1557作為出發(fā)菌株，以紫外線和亞硝基胍復(fù)合誘變的方法獲得了菌種的基因多樣化文庫，以搖瓶培養(yǎng)的方式，以不同濃度的β-紫羅酮

2、、二苯胺、NaCl、TiO2、H2O2和NaClO作為進(jìn)化壓力，進(jìn)行進(jìn)化工程培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接時(shí)間為48h。進(jìn)化工程的研究發(fā)現(xiàn)，上述物質(zhì)均能抑制紅發(fā)夫酵母的生長(zhǎng)，從而在解除抑制后得到高生物量菌株；用β-紫羅酮和二苯胺等類胡蘿卜素抑制劑做進(jìn)化壓力，對(duì)蝦青素的積累作用不明顯，而NaCl、TiO2、H2O2和NaClO等活性氧生成物則能在進(jìn)化的過程中刺激蝦青素的積累。
　　 對(duì)進(jìn)化工程所得菌群進(jìn)行篩選，選育出六株蝦青素高產(chǎn)菌株，并對(duì)其生理特性

3、進(jìn)行了初步研究。研究表明，進(jìn)化株的性狀得到很大改變，液體培養(yǎng)的菌液顏色由原來的橙紅色轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色，且生物量提高了兩倍以上；平板培養(yǎng)的菌落和野生型相比，直徑變大，顏色由橙黃色變?yōu)榧t色，不同于野生型的扁平、粗糙干燥的菌落，進(jìn)化株的菌落變?yōu)橥蛊?、濕?rùn)稠狀，推測(cè)菌株產(chǎn)生了莢膜。對(duì)進(jìn)化株進(jìn)行顯微觀察，進(jìn)化株的細(xì)胞變小、且更多以聚集在一起的形態(tài)出現(xiàn)，甚至出現(xiàn)了假菌絲。進(jìn)化株的蝦青素產(chǎn)量也得到提高，其中蝦青素產(chǎn)量最高的TiO2進(jìn)化所得菌株可達(dá)到1.2