應(yīng)用生物功能化納米顆粒檢測(cè)大腸桿菌O157-H7的研究.pdf

1、大腸桿菌O157∶H7(Escherichia coli O157:H7,E coli O157∶H7)是腸出血性大腸桿菌的一個(gè)主要菌型,曾在世界范圍內(nèi)多次暴發(fā),嚴(yán)重威脅著人們的健康并造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。本文建立了兩種生物功能化納米顆粒對(duì)大腸桿菌O157∶H7進(jìn)行檢測(cè)的方法,并用于對(duì)人工污染牛奶樣品的檢測(cè),主要研究方面如下:
　　 生物功能化納米顆粒的制備。利用檸檬酸鈉還原法制備粒徑為13 nm的金納米顆粒(Au-NPs),用大腸

2、桿菌O157∶H7多克隆抗體、巰基化捕獲DNA鏈、條形碼DNA鏈、探針DNA鏈等制備生物功能化Au-NPs,利用UV-vis、FEM等對(duì)制備和修飾過程進(jìn)行表征。
　　 通過共沉淀法制備粒徑為27±4 nm的磁性納米顆粒(MNPs),采用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)修飾和戊二醛交聯(lián)制備得到大腸桿菌O157∶H7單克隆抗體功能化的MNPs。
　　 生物功能化納米顆粒檢測(cè)大腸桿菌O157∶H7方法研究。利用生物功能化的

3、MNPs和Au-NPs與目標(biāo)物大腸桿菌O157∶H7進(jìn)行免疫反應(yīng),形成MNPs/目標(biāo)物/Au-NPs“三明治”式復(fù)合體,磁場(chǎng)分離后去雜交將Au-NPs上標(biāo)記的條形碼DNA釋放出,通過PCR擴(kuò)增和電泳對(duì)大腸桿菌O157∶H7進(jìn)行定量分析,建立了基于生物條形碼的常規(guī)PCR的檢測(cè)方法。
　　 該方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品的最低檢測(cè)限為10 CFU/mL,檢測(cè)范圍為10～106CFU/mL;與大腸桿菌其他血清型和常見食源性病原菌如大腸桿菌O86:H

4、2、大腸桿菌O111∶K58,大腸桿菌K12,沙門氏菌均不發(fā)生交叉反應(yīng),特異性好;方法的重復(fù)性較好,批內(nèi)重復(fù)性平均變異系數(shù)為(6.6±3.3)％,批間重復(fù)性平均變異系數(shù)為(7.3±3.6)％。在前一種方法的基礎(chǔ)上,將Au-NPs上標(biāo)記的條形碼DNA釋放出,利用DNA探針雜交條形碼DNA引起Au-NPs顏色變化建立基于生物條形碼探針和Au-NPs的檢測(cè)方法,結(jié)果表明,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品最低檢測(cè)限可達(dá)到102CFU/mL,該方法具有良好的特異性;而