基于牡蠣糖原硫酸酯結構的多糖構效關系研究.pdf

1、天然多糖具有多種生物活性，包括提高免疫力、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、抗凝血等。經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)許多具備某種特定生理活性的天然多糖，都具有著一定特殊的分子結構。這種特定的分子結構決定著其所具備的生物活性能力。但至今對多糖的結構與活性所對應關系（多糖構效關系）的研究仍然進展緩慢，其主要障礙之一就是缺乏能夠作為多糖構效關系研究的模式化合物，這種多聚化合物必須具備單一的可比較的單糖組成、明確且簡潔的單糖鏈接糖苷鍵型、一致的異頭物構型、明確的且取代位置

2、相同的取代基、可有效掌控的分子量大小。找到符合上述條件的模式多糖成為多糖構效關系研究中的無法回避的難點之一。天然多糖結構復雜，組成單糖復雜，連接鍵型多種多樣，取代基種類及取代位置變化多端，不同分子量但具有相同結構的多糖難以獲取等等，這一系列的難題使得將某種多糖具備的生理活性與其結構精確對應成為一件難以完成的任務。
　　 本研究從大連灣牡蠣，學名OstreatalienwhanensisCrosse體內(nèi)提取出一種多糖物質(zhì)，經(jīng)過分離

3、純化以及結構鑒定后得到一種純度良好的糖原物質(zhì)，此糖原經(jīng)過硫酸化修飾后得到了一種硫酸取代基專一取代在C-6位置的硫酸化糖原。此種糖原具有簡單的單糖組成和異頭物構型、一致的糖苷鍵鍵型、可控的分子長短、一致且位置確定的硫酸基取代，成為極其優(yōu)良的可以做為多糖構效關系研究的模型化合物。
　　 1、為獲取純度良好的牡蠣糖原，本研究采用多糖含量為評價指標優(yōu)化了牡蠣糖原提取方法，盡可能的去除糖原所共價連接的蛋白成分。最優(yōu)提取條件為:以胃蛋白酶酶

4、解提取，料液比1∶45，加酶量為底物質(zhì)量的1.5％，pH2.0，溫度37℃，酶解時間2h。酶解提取物再經(jīng)過乙醇醇沉沉淀、DEAE-52陰離子纖維素柱和SephadexG-100凝膠柱洗脫分離純化出一種純度良好的牡蠣多糖聚合物。
　　 2、對所提取到的多糖物質(zhì)進行了結構解析。樣品通過衍生化經(jīng)氣相色譜和液相色譜方法分別鑒定證明其只含有葡萄糖組成成分，IR掃描結果證明其為多糖類結構物質(zhì)。樣品甲基化后經(jīng)GC-MS分析發(fā)現(xiàn)此提取物具有1-

5、4Glc，1-4，6Glc和1-Glc的鏈接鍵型結構，屬于典型的糖原特征組成鍵型，并且還存在有痕量的其他葡萄糖組成鍵型。且1-4，6Glc與1-4Glc鍵型在數(shù)量上的比例約為1∶6.6，說明此糖原結構平均每6.6個葡萄糖存在一次分支。核磁共振譜分析同樣證明了此提取物的糖原組成結構。從而證實了該牡蠣提取物為牡蠣糖原，且其分支率較高，平均每6.6個葡萄糖殘基中發(fā)生一次分支。
　　 3、對此牡蠣糖原進行硫酸化修飾后，經(jīng)過分離純化得到3

6、個組分，分別對其進行分子結構鑒定，發(fā)現(xiàn)其中組分SOG的結構為硫酸基特異性取代于單糖殘基的C-6羥基位置的硫酸化牡蠣糖原.而組分SOGI的結構為硫酸基取代在糖殘基的C-2和C-3羥基位置的硫酸化牡蠣糖原。對此兩種糖原進行體外促淋巴細胞增殖能力的研究發(fā)現(xiàn)SOG的活性要明顯強于SOGI，而其分子結構除硫酸基取代位置因素不同外其他因素基本一致，這證明在多糖的構效關系中，硫酸基取代位點對于其促淋巴細胞增殖能力有著重要影響，且硫酸基在C-6位置取代

7、的結構其活性最佳。
　　 4、通過對硫酸化牡蠣糖原SOG進行高碘酸氧化降解，得到了一個硫酸基含量達到40.6％，分子量為6.3×106的組分SOGFI。將SOGF1與硫酸化修飾后得到的另外3種硫酸酯糖原SOG、SOGl和SOG2編成一研究對照組，構成了一組具有不同硫酸基含量、不同分子質(zhì)量但結構相似的硫酸酯糖原組，對其進行活性研究表明:此4種硫酸酯糖原均有促淋巴細胞增殖活性，其能力大小關系為SOG＞SOGFI＞SOGl＞SOG2。

8、對照他們的結構與活性之間關系分析發(fā)現(xiàn)，多糖結構對促淋巴細胞增殖活性影響因素的強弱順序為:多糖結構中硫酸基取代位點＞多糖中硫酸基含量＞硫酸基多糖分子量。
　　 總之，此多個多糖組分經(jīng)過結構對應的活性測試可以總結出，多糖中硫酸基的含量與活性間有著線性的平行對應規(guī)律，但分子量大小因素并沒有非常明確的影響規(guī)律。在其他結構因素相同的情況下，C-6位置硫酸基取代對多糖活性的提升具有決定性影響，其次，硫酸酯多糖的活性受結構中硫酸基含量的影響，