黃山石耳水溶性多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其構(gòu)效關(guān)系研究.pdf

1、黃山石耳是生長在安徽黃山地區(qū)的一種藥食同源的地衣植物，是一種營養(yǎng)價值較高的滋補食材。多糖是黃山石耳的主要生物活性成分，具有增強機體免疫能力、抗腫瘤、抗病毒以及抗氧化等生物活性。本論文采用現(xiàn)代提取分離純化技術(shù)、結(jié)構(gòu)表征手段、分子修飾方法以及藥理活性模型對黃山石耳多糖進行了研究，主要實驗結(jié)果如下:
　　(1)黃山石耳通過熱水浸提法獲得的石耳水提粗多糖(UP，得率為5.68％)經(jīng)EDAE-Cellulose離子交換層析色譜和凝膠滲透色譜

2、技術(shù)進行分離純化，獲得三個均一組分多糖UP1-1、UP2和UP3，相對分子量分別為2.81×105 Da、3.33×105 Da和5.05×103 Da。單糖組成分析表明，UP1-1、UP2和UP3都由甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成，分子摩爾比分別為1.0∶4.6∶0.8，1.7∶1.0∶1.2，2.5∶1.9∶1.8。另外UP3還含有少量的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖;結(jié)構(gòu)表征結(jié)果表明UP1-1主鏈主要包含(1→6)-β-D-Glcp、(1→4

3、)-β-D-Glcp和(1→6)-β-D-Manp，在(1→6)-β-D-Manp的O-3位連有支鏈1-β-D-Glcp、(1→3)-β-D-Galp和1-β-D-Galp。UP2主鏈由(1→6)-β-D-Glcp和(1→6)-α-D-Manp組成，在(1→6)-β-D-Glcp的O-3位連有支鏈(1→6)-α-D-Galp和β-1-D-Galp。UP3主鏈包含(1→6)-β-D-Glcp、(1→6)-β-D-Manp和(1→4)-β-

4、D-Xylp，在(1→6)-β-D-Manp和(1→4)-β-D-Xylp的O-3位連有支鏈β-1-D-Galp、β-1-L-Rhap和(1→3)-β-L-Arap。
　　(2)采用氯磺酸-吡啶法和混合磷酸鹽試劑法分別對黃山石耳多糖UP2進行了硫酸化和磷酸化修飾。硫酸化分子修飾結(jié)果表明，多糖UP2經(jīng)修飾后，獲得取代度為1.67的硫酸化片段UP2-S，其相對分子量為2.45×107 Da;紅外光譜實驗結(jié)果表明，在1250 cm-1、

5、813 cm-1和588 cm-1處吸收峰的增強分別是由不對稱的S=O鍵伸縮振動、對稱的C-O-S拉伸振動和O-S-O的不對稱變形引起的，以上都證實了-OSO3-1基團的加入，硫酸基成功與多糖UP2結(jié)合。磷酸化分子修飾結(jié)果表明，共獲得9個磷酸化片段，其中，在磷酸化試劑(三聚磷酸鈉與三偏磷酸鈉質(zhì)量比為6∶1)、pH=7、反應(yīng)溫度為90℃、反應(yīng)時間為4h的反應(yīng)體系下，獲得取代度最大為0.836的磷酸化衍生片段UP2-P，紅外光譜實驗結(jié)果表明

6、，在1260 cm-1和1110cm-1處的特征吸收峰分別歸因于P=O鍵和P-O-C的伸縮振動，再次驗證了多糖UP2磷酸化修飾的成功。
　　(3)采用體外生物活性實驗檢測了黃山石耳各多糖片段的免疫調(diào)節(jié)活性和抗腫瘤活性，并分析了其構(gòu)效關(guān)系。通過多糖體外刺激巨噬細(xì)胞RAW264.7進行免疫調(diào)節(jié)活性的研究，研究結(jié)果表明多糖UP1-1、UP2和UP3均能夠增強巨噬細(xì)胞的增殖活性、中性紅吞噬活性，以及促進NO產(chǎn)生量的增加。體外抗腫瘤活性研究

7、表明，多糖組分UP1-1、UP2和UP3對肝癌細(xì)胞Hep G2具有不同程度的腫瘤抑制活性。硫酸化衍生多糖在所有濃度下，均顯示出較高的體外抗腫瘤活性，當(dāng)UP2-S濃度達到200μg/mL時，腫瘤抑制率達到最大為50.36％，是相同濃度下的UP2的腫瘤抑制率的2.4倍。UP2-P對肝癌細(xì)胞Hep G2具有不同程度的腫瘤抑制活性，其中UP2-P5在各個濃度下均具有較好的抗腫瘤活性，最高抑制率可達40.80％。
　　本研究結(jié)果對黃山石耳多