2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
  實(shí)驗(yàn)一:忠倫阿湯治療CIA大鼠的療效觀察
  目的:觀察及評(píng)價(jià)忠倫阿湯對(duì)CIA大鼠的療效。
  方法:SD大鼠于第1天和第7天注射II型膠原蛋白進(jìn)行造模,取造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組(model)、甲氨蝶呤組(MTX)、忠倫阿湯高劑量組(zhongl hd)、忠倫阿湯中劑量組(zhongl md)、忠倫阿湯低劑量組(zhongl ld)、苦參堿組(matrine).于第一次免疫第11天開始灌胃

2、給藥,正常組生理鹽水灌胃,連續(xù)給藥6周。每周測(cè)量大鼠體重、后腳掌的厚度并進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分。
  結(jié)果:模型組大鼠后腳掌的厚度、腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)顯著增高(P<0.05),苦參堿、忠倫阿湯劑量依賴性的顯著降低大鼠后腳掌厚度和關(guān)節(jié)炎指數(shù),忠倫阿湯高劑量組優(yōu)于MTX組(P<0.05)。
  結(jié)論:忠倫阿湯可顯著緩解RA大鼠關(guān)節(jié)炎癥。
  實(shí)驗(yàn)二:忠倫阿湯對(duì)CIA大鼠Th1、Th2細(xì)胞分化的調(diào)控作用
  目的:觀察忠倫

3、阿湯對(duì)CIA大鼠Th1和Th2細(xì)胞分化的調(diào)控作用
  方法:SD大鼠分組給藥同實(shí)驗(yàn)一。灌胃6周后取材:
  1.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血Th1、Th2細(xì)胞;
  2.RT-PCR檢測(cè)IFN-γ和IL-4 mRNA的表達(dá);
  3.ELISA檢測(cè)血清IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-4和 IL-10蛋白的表達(dá)。
  結(jié)果:模型組與正常組比較,Th1細(xì)胞百分比以及其分泌的細(xì)胞因子IFN-γ mRNA和蛋白、

4、IFN-r、TNF-α、IL-1β蛋白水平和Th1/Th2比值明顯升高,Th2細(xì)胞百分比及其分泌的細(xì)胞因子IL-4 mRNA和蛋白、IL-4和IL-10蛋白水平明顯下調(diào)(P<0.05);與模型組相比,苦參堿和忠倫阿湯劑量依賴性的抑制這一過程(P<0.05),以忠倫阿湯高劑量組作用最顯著,對(duì)Th1、Th2細(xì)胞分化和IL-4的表達(dá)的調(diào)節(jié)優(yōu)于MTX組(P<0.05)。
  結(jié)論:忠倫阿湯能調(diào)節(jié)Th1和Th2細(xì)胞的平衡以及相關(guān)細(xì)胞因子的表

5、達(dá),抑制RA關(guān)節(jié)炎癥。
  實(shí)驗(yàn)三:忠倫阿湯對(duì)CIA大鼠Treg和Th17細(xì)胞的調(diào)控作用
  目的:觀察忠倫阿湯對(duì)CIA大鼠Treg和Th17細(xì)胞分化的調(diào)控作用
  方法:SD大鼠分組給藥同實(shí)驗(yàn)一。灌胃6周后取材:
  1.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞的百分比;
  2.RT-PCR檢測(cè)Foxp-3、TGF-β、IL-6和IL-17 mRNA表達(dá);
  3.ELISA檢測(cè)血清TGF-

6、β、IL-6和IL-17蛋白水平。
  結(jié)果:與正常組比較,模型組 Th17細(xì)胞百分比以及其分泌的細(xì)胞因子IL-6和IL-17 mRNA和蛋白水平明顯升高,Treg細(xì)胞百分比及其分泌的細(xì)胞因子 TGF-β mRNA和蛋白水平明顯下調(diào)(P<0.05);與模型組相比,苦參堿和忠倫阿湯劑量依賴性的調(diào)節(jié)異常Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞的分化(P<0.05),以忠倫阿湯高劑量組作用最顯著,對(duì)TGF-β、IL-4mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)優(yōu)于MTX組,

7、對(duì)Treg細(xì)胞分化、IL-17mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)弱于MTX組(P<0.05)。
  結(jié)論:忠倫阿湯通過調(diào)節(jié)CIA大鼠Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞的平衡以及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),從而抑制RA關(guān)節(jié)炎癥。
  實(shí)驗(yàn)四:忠倫阿湯對(duì)CIA大鼠NF-kappaB信號(hào)通路的調(diào)控作用
  目的:觀察忠倫阿湯干預(yù)CIA大鼠后NF-kappaB信號(hào)通路相關(guān)因子的表達(dá),研究忠倫阿湯調(diào)節(jié)RA的免疫機(jī)制。
  方法:SD大鼠分組給藥同實(shí)驗(yàn)一。

8、灌胃6周后分離外周血T細(xì)胞,通過Western-blot法檢測(cè)細(xì)胞p65、p-Iκ Bα、Iκ Bα蛋白的表達(dá)。
  結(jié)果:模型組 p65、p-IkBα蛋白的表達(dá)較正常組明顯升高(P<0.05)??鄥A和忠倫阿湯劑量依賴性的下調(diào)模型組p65、p-IkBα表達(dá),但弱于 MTX組(P<0.05)。各組間 IkBα表達(dá)未見明顯差異(P>0.05)。提示忠倫阿湯可能抑制T細(xì)胞NF-kappaB通路的活化以調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群的分化,從而治療RA

9、。
  結(jié)論:忠倫阿湯通過抑制 NF-kappaB信號(hào)通路活化以調(diào)節(jié) RA T細(xì)胞亞群的分化。
  第二部分:細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
  實(shí)驗(yàn)五:忠倫阿湯對(duì)體外培養(yǎng)T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子表達(dá)的影響
  目的:觀察忠倫阿湯對(duì)T細(xì)胞因子表達(dá)的影響
  方法:小鼠T細(xì)胞中加入佛波醇酯(PMA)和離子霉素(Ion)
  以不同終濃度的忠倫阿湯含藥血清與T細(xì)胞共同培養(yǎng),MTT法選擇最佳濃度,納入后續(xù)實(shí)驗(yàn),
  實(shí)驗(yàn)分組:

10、
  正常組:
  模型組:T淋巴細(xì)胞+PMA+Ion
  CH828組:T淋巴細(xì)胞+PMA+Ion+1μ M CHS828
  MTX組:T淋巴細(xì)胞+PMA+Ion+MTX
  苦參堿組:T淋巴細(xì)胞+PMA+Ion+苦參堿
  忠倫阿湯組: T淋巴細(xì)胞+PMA+Ion+25%忠倫阿湯含藥血清
  忠倫阿湯+CHS828組:T淋巴細(xì)胞+PMA+Ion+25%忠倫阿湯含藥血清+1μ M CHS82

11、8
  苦參堿+CHS828組:.T淋巴細(xì)胞+PMA+Ion+25%苦參堿+1μ M CHS828
  培養(yǎng)72小時(shí),收集細(xì)胞。
  RT-PCR法檢測(cè)忠倫阿湯含藥血清干預(yù)T細(xì)胞后,T細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、 Foxp-3、TGF-β、IL-6、RORyt和 IL-17mRNA的表達(dá);
  1.ELISA法檢測(cè)忠倫阿湯含藥血清干預(yù) T細(xì)胞后,T細(xì)胞因子IL-6、TGF-β、IFN-γ、TNF-a、IL-1β

12、、IL-4、 IL-10和IL-17蛋白表達(dá)
  結(jié)果:1、MTT法測(cè)定T細(xì)胞增殖,PMA的濃度為10ng/mL,lon濃度為1μ M促增殖作用最強(qiáng),25%濃度忠倫阿湯24h抑制T細(xì)胞增殖作用達(dá)到0.501523%,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)(P<0.05)。
  2、RT-PCR法檢測(cè)顯示,模型組 Foxp-3、IL-4、TGF-β mRNA水平顯著降低,IFN-γ、IL-6、RORyt和 IL-17mRNA水平顯著升高,提示模型組T

13、細(xì)胞分化失衡(P<0.05),與模型組相比,可被忠倫阿湯含藥血清組和苦參堿明顯抑制(P<0.05)。忠倫阿湯調(diào)節(jié)Foxp-3、IL-6表達(dá)的能力優(yōu)于MTX(P<0.05),其他細(xì)胞因子調(diào)節(jié)和MTX無明顯差異(P>0.05)。苦參堿對(duì)細(xì)胞因子的影響弱于MTX(P<0.05),提示中藥單體的作用弱于復(fù)方制劑。當(dāng)加入NF-kappaB信號(hào)通路特異抑制劑CHS828,模型組細(xì)胞因子的變化被抑制劑顯著抑制(P<0.05)。當(dāng)追加苦參堿或忠倫阿湯后

14、,藥物+抑制劑組的調(diào)節(jié)作用明顯優(yōu)于單獨(dú)抑制劑組(P<0.05)。
  3、ELISA法檢測(cè)所示,模型組和正常組比較IL-4、TGF-β和IL-10蛋白水平顯著降低,TNF-a、IL-1β、IFN-γ、IL-6和 IL-17蛋白水平顯著升高(P<0.05)。當(dāng)忠倫阿湯含藥血清組和苦參堿干預(yù)后,與模型組相比,此作用被明顯抑制(P<0.05),同時(shí)被NF-kappaB信號(hào)通路特異抑制劑CHS828明顯抑制(P<0.05)。當(dāng)追加苦參堿或

15、忠倫阿湯含藥血清后,藥物+抑制劑組的調(diào)節(jié)作用明顯優(yōu)于單獨(dú)抑制劑組(P<0.05),提示苦參堿和忠倫阿湯含藥血清調(diào)節(jié) RA T細(xì)胞分化不僅限于NF-kappaB信號(hào)通路。
  結(jié)論:忠倫阿湯具有免疫調(diào)節(jié)作用,可恢復(fù)T細(xì)胞因子的平衡,從而治療RA。
  實(shí)驗(yàn)六:忠倫阿湯對(duì)體外培養(yǎng)的T細(xì)胞NF-kappaB信號(hào)通路的影響
  目的:觀察忠倫阿湯對(duì)體外培養(yǎng)的T細(xì)胞NF-kappaB信號(hào)通路活化的影響。
  方法:T細(xì)胞分

16、離,分組同實(shí)驗(yàn)5,培養(yǎng)72小時(shí),收集細(xì)胞,采用Western blot方法檢測(cè)T細(xì)胞p65、p-IκBα和IκBα蛋白的表達(dá)。
  結(jié)果:模型組較正常組比較,刺激T細(xì)胞后,p65、p-IkBα蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.05),IkBα含量無明顯變化(P>0.05)。當(dāng)加入NF-kappaB通路抑制劑CHS828時(shí),通路明顯被抑制(P>0.05)。忠倫阿湯含藥血清組和苦參堿能顯著下調(diào)模型組 T細(xì)胞 p65、p-IkBα蛋白水平,抑制

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