黃芪扶正湯對(duì)免疫功能的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、第一章：不同劑量黃芪扶正湯對(duì)免疫抑制小鼠的溶血素和IL-2的影響 目的：觀(guān)察不同劑量的黃芪扶正湯對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，尋找最佳的干預(yù)劑量。 方法：取昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組，A組為空白對(duì)照組、B組為模型對(duì)照組、C組為9g生藥/kg組、D組為18g生藥/kg組、E組為36g生藥/kg組、F組為72g生藥/kg組，每組10只小鼠。除空白對(duì)照組外，其余小鼠在給藥后第8、10、12天，腹腔注射氫化可的松25mg/k

2、g/d，造出免疫抑制的動(dòng)物模型?？瞻讓?duì)照組和模型對(duì)照組予以生理鹽水灌胃，其余組用不同劑量的黃芪扶正湯水煮液進(jìn)行灌胃14天，檢測(cè)小鼠血清溶血素的生成和IL-2的含量。 結(jié)果：使用氫化可的松后，小鼠血清溶血素和IL-2的水平明顯下降，與空白組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。藥物組經(jīng)黃芪扶正湯干預(yù)后，小鼠血清溶血素和IL-2水平在18g生藥/kg的劑量開(kāi)始升高，在36g生藥/kg劑量時(shí)作用最強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3、 結(jié)論：1、使用氫化可的松造模成功。2、黃芪扶正湯的最佳干預(yù)劑量為36g生藥/kg。 第二章：黃芪扶正湯對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用 目的：從不同方面觀(guān)察黃芪扶正湯對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法：取昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為4組，分別為空白組、模型組、黃芪扶正湯組和與玉屏風(fēng)散組。除空白對(duì)照組外，其余小鼠在給藥后第8、10、12天，腹腔注射氫化可的松25mg/kg/d，造出免疫抑制模型，空白對(duì)照組腹腔注射等

4、量生理鹽水。藥物組小鼠灌胃給藥14天，空白及模型對(duì)照組予等量生理鹽水灌胃14天。給藥后第15天，取小鼠血液和脾臟進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。采用TUNEL法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞凋亡；免疫組化檢測(cè)小鼠脾臟免疫細(xì)胞Bcl-2與Bax蛋白的表達(dá)；測(cè)定小鼠血清溶血素生成；ELISA法測(cè)血清中INF-γ、IL-4水平；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)小鼠外周血T細(xì)胞亞群；RT-PCR和RealtimePCR方法測(cè)小鼠脾細(xì)胞INF-γ、IL-4、T-bet和GATA-3mRNA表達(dá)。

5、 結(jié)果：1、模型組與空白組相比，脾細(xì)胞凋亡增多（P<0.05），使用黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散后凋亡減少，與模型組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但組間也無(wú)差異。2、模型組與空白組相比，脾臟Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞減少Bax陽(yáng)性細(xì)胞增多（P<0.05），經(jīng)黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散干預(yù)后，Bcl-2增加Bax減少（P<0.05），但組間也無(wú)差異。3、模型組的血清溶血素低于空白組（P<0.05），經(jīng)黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散干預(yù)后，溶血素較模型組明顯升高（P<0.05）

6、，但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、模型組與空白組相比，血清INF-γ下降、IL-4升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散干預(yù)后，INF-γ明顯升高、IL-4下降（P<0.05），且黃芪扶正湯比玉屏風(fēng)散的效果更明顯（P<0.05）。5、模型組的CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞及CD4+/CD8+均明顯低于空白組（P<0.05），使用黃芪扶正湯或玉屏風(fēng)散后上述指標(biāo)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而黃芪扶正湯組比玉屏風(fēng)散組升高更明顯（P<0

7、.05）。6、RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果均顯示，模型組與空白組對(duì)比，細(xì)胞因子INF-γmRNA表達(dá)下降、IL-4mRNA表達(dá)增加，同時(shí)轉(zhuǎn)錄因子T-betmRNA表達(dá)下降而GATA-3mRNA表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散均能升高INF-γ和T-bet的mRNA表達(dá)，降低IL-4和GATA-3的mRNA表達(dá)，使T-bet/GATA-3比值更接近正常，且黃芪扶正湯效果更顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。。 結(jié)論：1

8、、黃芪扶正湯能提高免疫抑制小鼠的體液免疫功能，但與玉屏風(fēng)散比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2、黃芪扶正湯能提高免疫抑制小鼠的細(xì)胞免疫功能，平衡Th1/Th2細(xì)胞因子的比例，效果優(yōu)于玉屏風(fēng)散。3、黃芪扶正湯調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子比例的作用，可能部分源于對(duì)轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3的mRNA表達(dá)的影響。 第三章黃芪扶正湯對(duì)老年人免疫功能的影響 目的：探討黃芪扶正湯能否提高老年人的免疫和抗氧化功能。 資料與方法：選擇無(wú)嚴(yán)重疾

9、病、能生活自理的老年人（年齡>60歲）60例，男女各半。隨機(jī)分為中藥組和西藥組，中藥組服用黃芪扶正湯劑300ml每天分兩次服用。西藥組肌注卡介菌多糖核酸注射液（PolysaccharidenucleicacidfractionofBCG，BCG-PSN），商品名斯奇康針1mg/次，每周2次。兩組均用藥4周。干預(yù)前后分別抽取兩組觀(guān)察對(duì)象的靜脈血標(biāo)本，檢測(cè)相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)。檢測(cè)方法為：使用ELISA法測(cè)血清中IgG、INF-γ和IL-4濃度，

10、流式細(xì)胞術(shù)測(cè)人外周血T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞數(shù)量，黃嘌呤氧化酶法測(cè)人血清超氧化物歧化酶（SOD），比色法測(cè)人血清總抗氧化能力硫代巴比妥酸比色法測(cè)人血清微量丙二醛（MDA）。 結(jié)果：1、斯奇康組研究對(duì)象失訪(fǎng)率高于黃芪扶正湯組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、干預(yù)后，黃芪扶正湯組老年人血清IgG水平提高，與治療前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。但與斯奇康組對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、干預(yù)后，黃芪扶正湯組老年人血清INF-γ升高，IL-4下降，與治療前

11、相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。但與斯奇康組對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4、干預(yù)后，黃芪扶正湯組老年人全血CD4+/CD8+T細(xì)胞升高，與治療前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。而且治療前后的差值高于斯奇康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。5、干預(yù)后，黃芪扶正湯組全血CD56+細(xì)胞數(shù)量升高，與治療前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。但與斯奇康組相比無(wú)差異。6、干預(yù)后，黃芪扶正湯組研究對(duì)象的血清SOD和總抗氧化能力水平較治療前提高，差異有統(tǒng)

12、計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而陽(yáng)性對(duì)照組（斯奇康組）與治療前相比無(wú)明顯改變（P>0.05）。兩組間治療前后差值比較，黃芪扶正湯組顯著高于斯奇康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。7、干預(yù)后，黃芪扶正湯組研究對(duì)象的血清MDA水平較治療降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而陽(yáng)性對(duì)照組（斯奇康組）與治療前相比血清MDA水平無(wú)明顯改變（P>0.05）。兩組間治療前后差值比較，黃芪扶正湯組顯著高于斯奇康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。