乙醛脫氫酶用于解酒功能的商品化劑型研究.pdf

1、酒文化在我國有著悠久的歷史，因而相當(dāng)多的中國人有飲酒的嗜好。然而，長期飲酒、飲酒過度引發(fā)的健康問題也愈來愈受到人們的關(guān)注。為了更好地在傳承文化與保護(hù)健康之間取得平衡，目前市場上已出現(xiàn)相關(guān)的解酒藥和解酒保健品，主要依據(jù)中醫(yī)學(xué)上的疏經(jīng)活血、養(yǎng)肝護(hù)脾。而已有的研究表明，體內(nèi)乙醛脫氫酶2（ALDH2）酶活性減弱才是飲酒者出現(xiàn)不適癥狀的關(guān)鍵。因此，上述的解酒方法僅為治標(biāo)。如何利用基因工程的方法，大量體外發(fā)酵純化高酶活性的ALDH2，最終開發(fā)為解酒

2、酶制劑才是治本之道。
　　基于原核載體表達(dá)真核基因時(shí)，目的蛋白的表達(dá)量大，但宿主菌由于缺少相關(guān)蛋白質(zhì)體內(nèi)修飾加工機(jī)制，表達(dá)的目的蛋白一般不能正確折疊并喪失一些功能。
　　本論文圍繞pET32a-ALDH2重組菌發(fā)酵表達(dá)ALDH2的工藝改進(jìn)、金屬離子對ALDH2酶活性的影響、人工胃液/胰液對ALDH2的降解作用、防腐劑對ALDH2酶活性的維持、酶液貯存條件等進(jìn)行了研究，旨在開發(fā)一款最適的、高效的用于解酒功能的乙醛脫氫酶2（AL

3、DH2）商品化劑型。
　　首先，通過拓展ALDH2包涵體在透析復(fù)性時(shí)的處理工藝，發(fā)現(xiàn)低濃度磷酸鹽緩沖液較正常濃度的磷酸鹽緩沖液可以顯著提高ALDH2酶液的酶活性。同時(shí)，酶液經(jīng)真空冷凍干燥處理后，酶活性喪失比較明顯。因而，ALDH2商品化劑型優(yōu)先考慮液態(tài)制劑。
　　其次，通過研究常見金屬離子對ALDH2酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)除Na+外，K+、Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+均能在不同程度上提高ALDH2的酶活性。雙因素金屬離

4、子對ALDH2酶活性的影響效應(yīng)則既有促進(jìn)也有抑制，綜合考慮，K+是最佳的ALDH2酶活性促進(jìn)劑。
　　ALDH2在模擬的胃液中，能夠穩(wěn)定存在90min而不被降解，說明ALDH2可以耐受胃蛋白的分解作用，從而降低后續(xù)ALDH2液態(tài)劑型的設(shè)計(jì)難度，增加了該劑型的現(xiàn)實(shí)可能性。
　　但是，ALDH2在模擬的胰液中迅速被分解，預(yù)示胰蛋白酶可以分解ALDH2?？紤]到藥物代謝動(dòng)力學(xué)的復(fù)雜性，以及體外模擬與體內(nèi)實(shí)際環(huán)境的差異性，ALDH2有

5、望主要在胃液中發(fā)揮作用，在胰液中短暫停留，最后被分解。
　　隨后，本論文還對防腐劑山梨酸鉀對ALDH2酶活性維持的影響進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加有酶活性促進(jìn)劑 K+、防腐劑山梨酸鉀的 ALDH2酶液，酶活性保持率較單純添加酶活性促進(jìn)劑 K+的 ALDH2酶液高，表明山梨酸鉀在一定程度上可以維持ALDH2酶活性。
　　最后，論文對擬定的ALDH2液態(tài)劑型的貯存條件也進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)中，分別將添加有K+和山梨酸鉀的ALDH2酶液