發(fā)酵法分離純化茅巖莓黃酮研究.pdf

1、以茅巖莓茶葉成品為原料，使用熱水為溶劑，浸提茅巖莓黃酮類化合物，發(fā)酵法與超濾、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20和重結(jié)晶的相結(jié)合的分離純化方法對茅巖莓黃酮粗提物進(jìn)行分離純化，運(yùn)用顏色反應(yīng)和紫外光譜法初步鑒定，接著采用紅外光譜法和高效液相色譜法等鑒定方法對分離純化得到的黃酮單體化合物進(jìn)行鑒定。
　　用熱水來浸提茅巖莓黃酮化合物，采用單因素實(shí)驗(yàn)，考察了四個(gè)因素（提取溫度，提取時(shí)間，液料比，靜置時(shí)間）對提取率的影響，茅巖莓中二氫楊梅

2、素的最佳水提取工藝通過正交實(shí)驗(yàn)確定：液料比20:1，溫度90℃下，熱水提取90min，并在4℃環(huán)境靜置1d。二氫楊梅素采用此提取工藝，結(jié)果可測得提取率達(dá)到12.90％。
　　通過比較空白對照和實(shí)驗(yàn)組的黃酮含量，選用4種酵母菌中的葡萄酒酵母SY作為后續(xù)的發(fā)酵用菌種。利用單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，葡萄酒酵母SY培養(yǎng)基優(yōu)化配方為：1%葡萄糖，2%NH4Cl，0.1%CaCl2，0.1%MgSO4和0.05%KH2PO4?？疾彀l(fā)酵時(shí)間，發(fā)酵溫度以及

3、接種量3個(gè)因素的影響作用，確定了各因素的二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)的因素范圍。由二次通用旋轉(zhuǎn)組合實(shí)驗(yàn)結(jié)果可分析出，發(fā)酵過程中，影響還原糖含量的因素主次順序?yàn)椋菏紫劝l(fā)酵時(shí)間，其次是發(fā)酵溫度，最后接種量影響最小。交互作用中，對發(fā)酵液中還原糖含量影響顯著的是發(fā)酵時(shí)間與接種量兩者。使用響應(yīng)面分析，由此優(yōu)化得到最佳發(fā)酵條件：培養(yǎng)基中接種5%葡萄糖酵母SY，溫度29.5℃下持續(xù)發(fā)酵23h。采用此條件發(fā)酵，發(fā)酵液中還原糖含量為0.25mg/mL，比茅巖莓水

4、粗提液中1.10mg/mL還原糖含量下降了約77.3%。將發(fā)酵液濃縮，然后烘箱中干燥，得到了純度為45.6%的茅巖莓粗黃酮。
　　采用超濾、葡萄糖凝膠Sephadex LH-20和重結(jié)晶的方法對發(fā)酵后得到的黃酮粗提物進(jìn)行進(jìn)一步的分離和純化。單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化出，在0.2MPa的工作壓強(qiáng)和40℃的超濾溫度下進(jìn)行超濾。采用最優(yōu)條件進(jìn)行超濾，超濾后黃酮純度提高了約25%。進(jìn)一步的分離純化是利用葡萄糖凝膠Sephadex LH-20來進(jìn)行。紫

5、外分光光度法初步檢測，結(jié)合高效液相色譜的后續(xù)檢測，分離出了黃酮單體化合物。收集與標(biāo)準(zhǔn)品圖譜相近的洗脫液，濃縮干燥，得到黃酮單體88.5mg。經(jīng)高效液相色譜檢測，表明純度為98.23%。重結(jié)晶法采用了兩種工藝對超濾后得到的粗黃酮粉進(jìn)行純化。丙酮回流結(jié)合水重結(jié)晶法所得二氫楊梅素純度明顯高于工藝一，回收率也更高。
　　最后通過顏色反應(yīng)，可以初步判斷該單體化合物是二氫黃酮類化合物，紫外分光光譜紅外光譜判斷出該二氫黃酮類化合物結(jié)構(gòu)，該二氫黃