抗納米金銀顆?？贵w的制備及酶聯(lián)免疫定量檢測16nm金粒子新方法的建立.pdf

1、納米金銀自誕生以來在社會和科學的各個領(lǐng)域取得了巨大成就。如今,隨著納米科技的產(chǎn)業(yè)化,人們在日常生活中接觸納米材料的機會越來越多,各種尺寸的納米物質(zhì)已經(jīng)以不同的途徑進入我們的生活,當我們在為納米材料的光輝前景感到振奮的同時,我們還應(yīng)注意到納米材料可能會給人類帶來的負面影響。因此,為了納米金銀在納米生物技術(shù)中進一步應(yīng)用,必須對納米粒子在微觀水平進行定量。然而,在納米技術(shù)領(lǐng)域一個關(guān)鍵的問題就是確定最優(yōu)的定量這些納米粒子的分析方法。
　　

2、為了解決這個問題,本實驗首先制備了納米銀和納米金的特異性抗體,并利用抗原抗體之間的特異性反應(yīng)成功建立了間接競爭酶聯(lián)免疫分析法(ic-ELISA)和直接競爭酶聯(lián)免疫分析法(dc-ELISA)實現(xiàn)對這些納米粒子的定量檢測。為納米粒子的定量檢測提供了高靈敏、高特異性和簡單快速的新方法。本論文的主要內(nèi)容和創(chuàng)新點體現(xiàn)在以下幾個方面:
　　一、成功制備了納米銀的高特異性抗體。采用重氮化法,將自制的50nm銀粒子經(jīng)過修飾后與載體蛋白質(zhì)進行偶聯(lián)反

3、應(yīng)制備成人工全抗原,制備免疫抗原時載體蛋白采用牛血清蛋白(BSA)。用免疫抗原免疫動物得到終點效價達到1:64000的納米銀多克隆抗體。
　　二、成功制備了納米金的高特異性抗體。采用重氮化法,將自制的16nm金粒子經(jīng)過修飾后與載體蛋白質(zhì)進行偶聯(lián)反應(yīng)制備成人工全抗原。用免疫抗原免疫動物得到終點效價達到1:64000的納米金多克隆抗體。
　　三、制備了納米金 HRP酶標記抗體。采用硫酸銨沉淀法對酶標抗體進行了純化,將純化好的酶標

4、記納米金抗體進行定量分析。計算結(jié)合物的酶量、IgG量和克分子比值分別為1.386 mg/mL、0.824 mg/mL和6.73。酶結(jié)合率為27.72％。
　　四、基于納米金抗原和抗體間的特異性反應(yīng),成功建立了間接競爭酶聯(lián)免疫分析法對16nm金粒子定量檢測,并對可能影響ic-ELISA的相關(guān)因素進行了優(yōu)化。在最優(yōu)條件下,該方法的最低檢測限(LOD)為0.01ng/mL,與相似物的交叉反應(yīng)率均低于10%,樣品的加標回收率為97.6-1

5、20.6%,相對標準偏差(RSD)為1.5-6.1%。本文所建立的 ic-ELISA對16nm金粒子的檢測方法具有靈敏度高,特異性好,穩(wěn)定可靠等優(yōu)點,同時為其他納米材料的定量分析提供了可靠方法,為人們進一步了解納米材料提供了分析手段。
　　五、建立了抗原包被直接競爭酶聯(lián)免疫分析法檢測16納米金粒子的定量分析方法,并對可能影響ic-ELISA的相關(guān)因素進行了優(yōu)化。在最優(yōu)條件下,檢測限低至0.06ng/mL,線性范圍為0.1-500