不同尺寸納米銀、金粒子的免疫定量檢測及銀納米粒子的免疫生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、納米材料的優(yōu)良性質(zhì)使得其被應(yīng)用于生活生產(chǎn)的光、電、熱、磁等各個領(lǐng)域中。在紛繁多樣的納米材料中，金屬納米材料，如納米金和納米銀，引起了科學(xué)家們廣泛的興趣。其中納米金可用來制備催化劑、傳感器，納米銀則被廣泛用來制作催化劑、抗菌劑、洗滌劑等。納米產(chǎn)品的頻繁使用帶來了人們對其安全性的思考，調(diào)查研究顯示納米材料對生物體存在一定的毒理作用，例如納米銀，且毒理的大小與納米粒子的尺寸大小有關(guān)。納米材料在生命體安全性方面存在的問題使得人們對納米材料的定量

2、檢測變得至關(guān)重要。
　　受文獻的啟發(fā)：首先制得不同尺寸納米銀，由于納米銀屬于小分子，只具有免疫反應(yīng)性而不具有免疫原性，因此，通過將其表面進行修飾，再連接上大分子蛋白質(zhì)，得到了不同尺寸納米銀的全抗原。最后將不同尺寸納米銀全抗原注射到成年雄性新西蘭大白兔體內(nèi)，使之產(chǎn)生不同尺寸的納米銀抗體，最后利用酶聯(lián)免疫分析法達到對待測尺寸納米銀的一種定量檢測的目的。
　　通過免疫學(xué)與毒理學(xué)相結(jié)合的方法，將血清效價滿足實驗要求的雄兔動脈取血并將

3、其內(nèi)臟中各個器官（心臟，肝臟，腎臟，脾，生殖，大小腸）取出，用固定液固定，利用免疫組織化學(xué)的方法檢測不同蛋白質(zhì)在納米銀處理組和未經(jīng)任何處理的空白對照組中的表達水平以及細胞形態(tài)、大小等方面發(fā)生的變化。具體工作內(nèi)容如下：
　　1.化學(xué)還原法合成了50 nm Ag，20 nm Ag
　　利用檸檬酸鈉還原法制得了50 nm Ag，20 nm Ag，其中20 nm Ag的合成是首先制備4nmAg的種子溶液，再通過種子溶液制得20 nm

4、 Ag溶膠。利用紫外可見分光光度計表征兩種尺寸納米銀的最大吸收波長，掃描電鏡表征兩種尺寸納米銀的形狀和大小。
　　2.化學(xué)修飾法制得了50 nm Ag免疫原，20 nm Ag免疫原
　　由于納米銀屬于半抗原，雖然具有免疫反應(yīng)性即能和抗體反應(yīng)，但卻無免疫原性即不能激發(fā)機體產(chǎn)生抗體，因此，需要將其連接上大分子蛋白質(zhì)得到既有免疫反應(yīng)性也有免疫原性的納米銀全抗原。具體方法為：利用Ag-S鍵，將巰基乙酸修飾到納米銀上，在修飾后的納米銀

5、表面上用偶聯(lián)劑1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）和碳二亞胺鹽酸鹽偶聯(lián)上蛋白質(zhì)，即得到了不同尺寸納米銀全抗原。
　　3.間接競爭酶聯(lián)免疫分析法（ic-ELISA）定量檢測50 nm Ag
　　將50 nm Ag半抗原制成全抗原，采取皮下多點注射的方法，注射到新西蘭大白兔背部，使之產(chǎn)生抗50 nm Ag的多克隆抗體，再利用抗原抗體高效的結(jié)合，通過ic-ELISA法達到對50 nm Ag的定量檢測。最終得到線性方程：A=0.720-

6、0.065lgC，相關(guān)系數(shù)R2=0.98，最低檢測限為0.0087ng/mL。加標(biāo)回收率在84％-124.8%，從而得出結(jié)論：間接競爭酶聯(lián)免疫分析法檢測50 nm AgNPs，重現(xiàn)性高，操作簡單，準(zhǔn)確性好。
　　4.間接競爭酶聯(lián)免疫分析法定量檢測80 nm Au
　　繼續(xù)利用間接競爭酶聯(lián)免疫法定量檢測了80 nm Au，通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線得到線性方程為：A=1.18-0.145lgC，相關(guān)系數(shù)R2=0.994，檢出限為0.00

7、57ng/mL，回收率為82%-117%。該方法靈敏度高，檢出限低。
　　5.20 nm AgNPs，50 nm AgNPs的免疫生物學(xué)效應(yīng)研究
　　利用免疫組織化學(xué)的方法研究了20 nm Ag，50 nm Ag兩處理組以及空白對照組兔肝臟中谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT2），乙酰膽堿酯酶（AChE），膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT），及兔睪丸中細胞核增殖抗原（PCNA）以及雄激素受體（AR）等蛋白的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，納米銀處理組中各蛋白的表達