基于免疫磁珠和分子印跡技術建立農藥西維因檢測方法的研究.pdf

1、西維因屬于氨基甲酸酯類農藥，主要用于稻谷、小麥、高粱、玉米、花生、蔬菜、果樹等害蟲的預防及治理。西維因屬于中、低毒性農藥，其防治機理是通過抑制害蟲體內乙酰膽堿酯酶的活性，使乙酰膽堿在蟲體組織中蓄積，干擾蟲體的正常分泌系統(tǒng)。農產品中西維因殘留對人體亦有同樣作用，常導致急性毒性、免疫毒性、生殖毒性等危害，因此對其檢測具有十分重要的意義。
　　農藥殘留是現(xiàn)階段食品安全重點檢測項目之一。農藥殘留最主要的檢測方法是儀器檢測法。儀器檢測法具有

2、靈敏度高、重現(xiàn)性好、適用范圍廣、可同時進行多殘留分析等優(yōu)點，但儀器檢測法需要復雜的樣品前處理過程，檢測條件要求較高，檢測時間較長且需要專業(yè)人員操作。食品流通從市場到消費者速度快，范圍廣，儀器檢測難以實現(xiàn)快速檢測的目的。加強對農藥殘留快速檢測新方法的研究，研制方便、快捷、易操作的檢測方法勢在必行。
　　因此，本論文以免疫磁珠和分子印跡技術為基礎，建立三種快速檢測農藥西維因的方法。主要結論如下：
　　(1)將人工合成的西維因半抗

3、原與牛血清白蛋白偶聯(lián)形成完全抗原，采取背部皮下多點注射法免疫新西蘭大耳白兔得到西維因多克隆抗體。同時采用一步水熱法制備具有氨基功能團的Fe3O4磁納米粒子。以戊二醛為交聯(lián)劑偶聯(lián)氨基化Fe3O4磁納米粒子和西維因多克隆抗體，作為捕捉器；以辣根過氧化物酶標記的西維因半抗原作為信號放大器，采用直接法通過測定吸光值實現(xiàn)定量檢測西維因含量。在最佳條件下，西維因濃度在1×10?3-10 mg L-1范圍內具有較好的線性關系，抑制率最高可達90.6％

4、；測得的半抑制濃度(IC50)為0.077 mg L-1，檢出限(IC15)為1.48×10?3 mg L-1。以濃度1 mg L-1的西維因在相同條件下重復檢測三次，測得的相對標準偏差為1.67%。通過一系列的分析，所建立的抗體包被免疫磁珠可以用于西維因的快速檢測。
　　(2)以紙片為載體，農藥西維因為模板分子，甲基丙烯酸(MAA)為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈(AIBN)為引發(fā)劑，采用傳統(tǒng)

5、熱聚合法在硅烷化修飾的紙片表面聚合分子印跡層，利用形成的對模板分子具有特異性識別能力的分子印跡位點作為西維因的仿生抗體，建立仿生酶聯(lián)免疫法，實現(xiàn)定性及定量檢測西維因含量。在最佳條件下，測得西維因濃度在1×10?3-1 mg L-1范圍內具有較好的線性關系，抑制率最高可達69.8%，測得的半抑制濃度(IC50)為0.116 mg L-1，檢出限(IC15)為2.1×10?3 mg L-1。以濃度1 mg L-1的西維因在相同條件下重復檢測

6、三次，測得的相對標準偏差為1.69%。通過一系列的分析，所建立的以紙片為載體的分子印跡仿生酶聯(lián)免疫法可以用于西維因的快速檢測。
　　(3)以功能化離子液體1-乙烯基-3-己基咪唑六氟磷酸鹽為輔助媒介，通過靜電作用修飾量子點使其有效參與分子印跡聚合物的制備。以農藥西維因為模板分子，MAA為功能單體，EGDMA為交聯(lián)劑，AIBN為引發(fā)劑，采用傳統(tǒng)熱聚合方法制備西維因量子點-分子印跡熒光傳感材料。通過吸附西維因造成量子點熒光強度變化實現(xiàn)

7、定量檢測西維因含量。在最佳條件下，測得西維因濃度在4.97×10?7-3.98×10?4 moL L-1范圍內熒光強度變化呈現(xiàn)良好的線性關系，測得的檢出限為1.47×10?7 moL L-1。以濃度10 mg L-1的西維因在相同條件下重復檢測五次，測得的相對標準偏差為2.5%。同時還對其再生重復使用性進行了研究。在相同條件下重復檢測三次，測得的相對標準偏差為3.8%。通過一系列的分析，所建立的量子點-分子印跡熒光傳感材料可以用于西維因