反式茴腦生物合成茴香酸的工藝研究.pdf

1、本文以反式茴腦為底物進行了生物合成茴香酸菌株的篩選，優(yōu)化了目標(biāo)菌株的培養(yǎng)轉(zhuǎn)化工藝條件，并考察了降解體系的關(guān)鍵中間體。同時，針對反式茴腦的生物降解與轉(zhuǎn)化體系建立了紫外分光光度法和高效液相色譜法兩種定量分析方法。研究取得的主要成果如下:
　　 (1)建立了反式茴腦-茴香酸二元體系的紫外分光光度法。在一定的條件下內(nèi)，反式茴腦和茴香酸的混合物在250.0 nm和268.5 nm處的吸收值分別與兩者的總摩爾濃度和反式茴腦的摩爾分?jǐn)?shù)成線性關(guān)

2、系，通過引入模擬技術(shù)構(gòu)建立了反式茴腦-茴香酸體系的快速定量分析方法。
　　 (2)建立了檢測反式茴腦、茴香醇、茴香醛、茴香酸四元體系的高效液相色譜法。最佳色譜條件:紫外檢測波長260 nm，流動相乙腈∶水(70∶30)，流速1.0 mL·min-1，柱溫25℃。實驗結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確可靠，可用于反式茴腦生物轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物檢測與過程監(jiān)控。
　　 (3)開展了生物降解轉(zhuǎn)化反式茴腦菌株的篩選。從廣西大學(xué)農(nóng)場果樹下土壤、高峰林場的

3、八角枝葉果以及八角樹下土壤篩選到189株菌，通過初篩和復(fù)篩得到一株茴香酸摩爾生成率達到9.21％的菌株ZZ-1，經(jīng)初步鑒定該菌株為霉菌。
　　 (4)對菌株ZZ-1生物降解與轉(zhuǎn)化反式茴腦生成茴香酸的培養(yǎng)基配方以及培養(yǎng)轉(zhuǎn)化條件進行了優(yōu)化研究。最佳的培養(yǎng)基配方:葡萄糖25.0 g·L-1、酵母膏2.5g·L-1、氯化銨5.0g·L-1、NaC10.3 g·L-1、MgSO4·7H2O0.3 g·L-1、K2HPO4·3H2O1.2

4、g·L-1、FeSO4·7H2O0.01 g·L-1;最佳的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化條件:初始pH值為6.0，溫度為30℃;培養(yǎng)時間和轉(zhuǎn)化時間均為72 h。經(jīng)優(yōu)化后，茴香酸的摩爾生成率從9.21％提高到19.10％。
　　 (5)考察了反式茴腦生物降解轉(zhuǎn)化體系中的關(guān)鍵中間體。通過色譜層析分離以及GC-MS和IR檢測，發(fā)現(xiàn)降解轉(zhuǎn)化過程中生成了1-(4-甲氧基苯基)-1，2-環(huán)氧丙烷、1-(4-甲氧基苯基)-1，2-丙二醇和茴香醇等中間體。這為反