天麻醇提物對(duì)灰樹花深層發(fā)酵代謝影響及其機(jī)制研究.pdf

1、本論文是關(guān)于天麻醇提物對(duì)灰樹花深層發(fā)酵代謝影響及其機(jī)制的研究。主要研究?jī)?nèi)容包括天麻醇提物對(duì)灰樹花發(fā)酵的影響，天麻醇提物各成分在灰樹花發(fā)酵過(guò)程中的轉(zhuǎn)化，對(duì)羥基苯甲醇對(duì)灰樹花產(chǎn)胞外多糖的影響及其發(fā)酵動(dòng)力學(xué)，灰樹花發(fā)酵過(guò)程中葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的初步研究。
　　研究和建立了天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛和巴利森甙定性和定量的檢測(cè)方法，并分析了高壓滅菌前后天麻醇提液主要成分的變化，天麻醇提液經(jīng)過(guò)高壓滅菌后的天麻素含量為14.6955 mg/

2、g、對(duì)羥基苯甲醇含量為1.0857 mg/g、對(duì)羥基苯甲醛含量為1.9753mg/g、巴利森甙含量為2.0571 mg/g。
　　研究了不同濃度的天麻醇提液對(duì)灰樹花菌絲體生長(zhǎng)和胞外多糖合成的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：當(dāng)添加量在7％(v/v)時(shí)（100 mL發(fā)酵液體系中添加7 mL的天麻醇提液），相當(dāng)于100 mL發(fā)酵體系中約含有0.7 g天麻，此時(shí)灰樹花菌絲體和胞外多糖（EPS）的產(chǎn)量達(dá)到最大，分別為3.35±0.09 g/L和444.24

3、±17.76 mg/L。
　　試驗(yàn)和評(píng)價(jià)了天麻醇提物中各單一成分對(duì)灰樹花菌絲體生長(zhǎng)和胞外多糖合成的影響，添加依據(jù)為天麻醇提液添加量在7%(v/v)時(shí)所含有的各單一成分的含量。分別添加：Ⅰ天麻醇提物(7 g/L)、Ⅱ天麻素(103 mg/L)、Ⅲ對(duì)羥基苯甲醇(7.6 mg/L)、Ⅳ對(duì)羥基苯甲醛(13.8 mg/L)以及Ⅴ三種等質(zhì)量的單一成分組合添加。結(jié)果表明：這五組實(shí)驗(yàn)相比于空白組（未添加）均能一定程度促進(jìn)灰樹花菌體生長(zhǎng)和胞外多糖的

4、生物合成，其中第Ⅰ組和第Ⅴ組促進(jìn)灰樹花菌絲體生長(zhǎng)和胞外多糖合成的效果基本一樣且為最佳。第Ⅱ組次之。第Ⅲ組和第Ⅳ組不是很明顯，然而通過(guò)計(jì)算灰樹花胞外多糖生產(chǎn)率發(fā)現(xiàn)對(duì)羥基苯甲醛和對(duì)羥基苯甲醇相比于其他組更能提高菌絲體產(chǎn)胞外多糖的能力。
　　試驗(yàn)和分析了天麻醇提液中各成分在灰樹花發(fā)酵過(guò)程中含量的變化，每100 mL發(fā)酵液中天麻素從10.28 mg降到5.36 mg，降低了47.86%；對(duì)羥基苯甲醇從0.76 mg降到0.67 mg，下降

5、了11.84%；對(duì)羥基苯甲醛從1.38 mg降到0.35 mg，下降了74.64%；而只有巴利森甙含量增加了，從1.44 mg升到了3.76 mg，提高了161.11%。并采用靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步揭示，灰樹花發(fā)酵可以將對(duì)羥基苯甲醇和對(duì)羥基苯甲醛轉(zhuǎn)化合成天麻素，可能的途徑是對(duì)羥基苯甲醇在灰樹花菌絲體懸浮液中被糖基化而合成天麻素，而對(duì)羥基苯甲醛在灰樹花菌絲體懸浮液中先被還原成對(duì)羥基苯甲醇，然后再少量合成了天麻素。
　　研究了對(duì)羥基

6、苯甲醇對(duì)灰樹花胞外多糖合成的影響。對(duì)羥基苯甲醇添加量為200 mg/L時(shí)對(duì)灰樹花菌體生物量和胞外多糖合成的促進(jìn)作用效果最明顯，與空白組（未添加對(duì)羥基苯甲醇）分別提高了22.73%和10.24%。此外還進(jìn)行了添加對(duì)羥基苯甲醇后灰樹花發(fā)酵動(dòng)力學(xué)研究，考察了發(fā)酵過(guò)程中菌絲量、殘?zhí)牵ㄟ€原糖）、胞外多糖、pH值、對(duì)羥基苯甲醇和天麻素含量的變化。
　　研究了灰樹花發(fā)酵工程中葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的調(diào)控機(jī)制。葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶最適反應(yīng)溫度為50℃，而其熱穩(wěn)