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文檔簡介
1、灰樹花含有較高量的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和礦物質(zhì),比其他蘑菇高出一倍,是種珍貴的藥食兩用菌?;覙浠ǘ嗵蔷哂休o助抗腫瘤、調(diào)節(jié)人體免疫和抗衰老等作用。我國是農(nóng)業(yè)大國,谷物副產(chǎn)品產(chǎn)量多且價格低廉,其營養(yǎng)價值高,具有廣闊的經(jīng)濟增值空間。為了高效利用米糠麩皮并高產(chǎn)灰樹花多糖多糖,在不添加其它碳源氮源的情況下,本研究通過物理誘變篩選出利用全米糠麩皮高產(chǎn)多糖的誘變菌株,優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基的組成,探索了出發(fā)菌株和變異菌株的多糖體外抗氧化活性,為今后低投入
2、、高產(chǎn)出灰樹花多糖產(chǎn)業(yè)化奠定理論和應(yīng)用基礎(chǔ)。
本研究的主要內(nèi)容如下:
(1)通過微波誘變、紫外誘變對灰樹花進行誘變,篩出菌絲生長速度較快且菌絲密實,菌絲多糖產(chǎn)率較高且較穩(wěn)定的變異菌株JSU13-1和JSU13-2。通過拮抗性試驗、電泳試驗分析,推斷誘變菌株發(fā)生遺傳上的變化。
(2)通過對液體發(fā)酵培養(yǎng)基均勻試驗的探索,采用SPSS回歸分析得到JSU13-1和JSU13-2在液體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌絲混
3、合干重Y1(g/100mL)、菌絲混合多糖Y2(mg/100mL)和胞外多糖Y3(mg/100mL)為因變量,米糠X1(g/100mL)、麩皮X2(g/100mL)、KH2PO4X3(g/100mL)、MgSO4·7H2O X4(g/100mL)為自變量的關(guān)系方程。菌株JSU13-1菌絲混合干重Y1-1(g/100mL)、菌絲混合多糖Y1-2(mg/100mL)和胞外多糖Y1-3(mg/100mL)和米糠X1(g/100mL)、麩皮X2
4、(g/100mL)、KH2PO4 X3(g/100mL)、MgSO4·7H2O X4(g/100mL)的回歸方程分別為:Y1-1=0.53X1+0.571X2-0.119X3+0.538X4-0.163Y1-2=26.763X1+22.427X2-61.591X3+7.387X4-17.230Y1-3=41.202X1+81.712X2+21.659X3+151.907X4-17.874
菌株JSU13-2菌絲混合干重Y1
5、-1(g/100mL)、菌絲混合多糖Y1-2(mg/100mL)和胞外多糖Y1-3(mg/100mL)和米糠X1(g/100mL)、麩皮X2(g/100mL)、KH2PO4X3(g/100mL)、MgSO4·7H2OX4(g/100mL)的回歸方程分別為:Y2-1=0.536X1+0.560X2-0.353X3+0.570X4-0.235Y2-2=32.275X1+42.244X2+72.571X3+58.332X4-81.330Y2-
6、3=58.163X1+91.186X2-106.754X3+153.171X4-38.696
經(jīng)回歸分析,菌株JSU13-1和JSU13-2的最佳培養(yǎng)基組成都為:米糠3g/100mL、麩皮3g/100mL, KH2PO4為0.25 g/100mL, MgSO4·7H2O0.25g/100mL,維生素B11mg/100 mL。
(3)10L發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)的結(jié)果,小于搖瓶發(fā)酵,可以解釋為即便保證了均勻的通氣量,但
7、在下罐時可觀察到罐壁上附著很多失活的菌絲,使罐內(nèi)的菌絲體數(shù)量較大程度下降,多糖產(chǎn)量降低;另一方面,在上罐發(fā)酵時,為了測發(fā)酵天數(shù)對菌絲混合干重、菌絲混合多糖和胞外多糖的影響,每隔24h取樣100mL,取樣量也對發(fā)酵液有影響,從而上罐發(fā)酵的結(jié)果小于搖瓶發(fā)酵。
(4)出發(fā)菌株Grifola sp.CGMCC4179和變異菌株JSU13-1、JSU13-2的胞外多糖和菌絲混合多糖都是不含蛋白質(zhì)的非淀粉類多糖。對誘變菌株的灰樹花多糖
8、進行紅外光譜掃描分析,均顯示出具有一般多糖類物質(zhì)的特質(zhì)吸收峰。
(5)通過清除羥自由基、DPpH·和還原能力三組實驗,研究了不過濾米糠麩皮發(fā)酵所產(chǎn)生的多糖的體外抗氧化活性。結(jié)果表明出發(fā)菌株Grifola sp.CGMCC4179和變異菌株JSU13-1、JSU13-2的胞外多糖和菌絲混合多糖都具有一定的抗氧化活性,并且抗氧化能力隨著多糖濃度的增而不同程度的增加。另一方面,誘變菌種發(fā)酵所得的灰樹花多糖的抗氧化能力都高于原始菌
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