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文檔簡介
1、磺胺嘧啶(Sul fadiazine,SD)是一類人工合成的苯磺酰胺類藥物,是廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床的廣譜抑菌藥物,對多種革蘭氏陽性菌和某些革蘭氏陰性菌具有較顯著的抑菌效果;甲氧芐啶(Trimethoprim,TMP)又名甲氧芐氨嘧啶,屬于人工合成的二氨基嘧啶類化合物,主要與磺胺類藥物組成復(fù)方制劑,用于擴大抗菌譜、增強抗菌活性,在臨床上廣泛應(yīng)用。復(fù)方嘧啶混懸液是白色或淡黃色混懸液,主要成分為磺胺嘧啶(SD)和甲氧芐啶(TMP),屬于廣譜抗菌
2、藥,主要用于敏感細菌所致的雞、鴨等的細菌性疾病及原蟲感染。
長期及不合理使用磺胺類藥物會造成藥物在畜產(chǎn)品中的殘留,對動物本身來說,飼料中磺胺類藥物過量,對動物肌體也有損害并影響生產(chǎn)性能,進而破壞人體正常功能同時對環(huán)境也造成損害。目前我國與歐盟等其他國家與地區(qū)對磺胺類藥物的最高殘留限量也做了明確的規(guī)定,因此,動物性食品中的磺胺類藥物殘留檢測對人類的健康有著重要意義。
本文旨在建立一種簡單、快速、靈敏的同時檢測血漿中磺胺
3、嘧啶與甲氧芐啶濃度的超高液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法,并應(yīng)用于生物等效性研究;并建立了同時檢測雞肉與雞肝中磺胺嘧啶與甲氧芐啶的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的殘留檢測方法,主要結(jié)論如下:
1.為保證生物等效性實驗順利進行,本文先對兩種復(fù)方制劑進行含量測定。本次含量測定依照進口獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分別對參比制劑與受試制劑進行測定,按照外標(biāo)法以峰面積計算含量,結(jié)果:磺胺嘧啶在參比和受試制劑的含量分別為標(biāo)示量的99.78%、99.82%,甲氧芐啶在參比與受試制劑
4、中的含量分別為標(biāo)示量的99.15%、97.66%,表明復(fù)方磺胺嘧啶混懸液的受試與參比制劑含量無顯著差異,為生物等效性實驗奠定基礎(chǔ)。
2.建立了同時檢測血漿中磺胺嘧啶與甲氧芐啶的超高液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法。樣品經(jīng)甲醇提取,超高液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測定分析,內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果顯示:兩種藥物在血漿中的線性相關(guān)系數(shù)R2都大于0.99,準(zhǔn)確度與精密度采用四個濃度的標(biāo)準(zhǔn)添加法來考察,日內(nèi)與日間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在1.76-13.41%,2.3-
5、10.6%范圍內(nèi),平均回收率在80-110%范圍內(nèi),且穩(wěn)定性良好,磺胺嘧啶與甲氧芐啶在血漿中的檢測限分別為0.05μg/mL,0.01μg,/mL。
3.生物等效性研究:采取平行設(shè)計,受試組與參比組各40只雞,單次口服灌胃給藥,復(fù)方嘧啶混懸液以總劑量38.4mg/kg給藥,分別在0h(給藥前)、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、8、12、24、36、48h翅下靜脈采血,血漿樣品經(jīng)建立的同時檢測磺胺嘧啶與甲氧
6、芐啶的超高液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定,軟件DAS3.0分析,結(jié)果表明:受試制劑AUC與Cmax分別在參比制劑速服寧80-120%,70-143%(對數(shù)轉(zhuǎn)換)的等效范圍之內(nèi),表明復(fù)方磺胺嘧啶混懸液受試制劑與參比制劑速服寧是生物等效的。
4.建立同時檢測雞肉與雞肝中的磺胺嘧啶與甲氧芐啶的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的殘留檢測方法,樣品經(jīng)乙腈提取,正己烷除脂,濃縮后乙腈復(fù)溶,液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測,內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果顯示:兩種藥物在雞肉與雞肝中的線
7、性相關(guān)系數(shù)R2都大于0.99、且日間與日內(nèi)精密度在2.2%-10.2%之間,回收率在88%-109%范圍內(nèi),穩(wěn)定性良好,磺胺嘧啶與甲氧芐在雞肉中的檢測限為4μg/kg,0.8μg/kg,在肝中的檢測限分別為20μg/kg,4μg/kg,并將方法應(yīng)用于生物等效性實驗后實際組織樣品的測定,結(jié)果證明了本方法可行。
綜上所述,本文建立了同時檢測血漿中磺胺嘧啶與甲氧芐啶的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法,應(yīng)用于生物等效性研究,表明復(fù)方混懸嘧啶混懸液
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