量子點熒光微球免疫層析試紙條定量檢測玉米中的黃曲霉毒素B1.pdf

1、量 子 點 熒 光 微 球 免 疫 層 析 試 紙 條 定 量 檢 測 玉 米 中 的 黃 曲 霉 毒 素量 子 點 熒 光 微 球 免 疫 層 析 試 紙 條 定 量 檢 測 玉 米 中 的 黃 曲 霉 毒 素 B1任 美 玲任 美 玲南 昌 大 學南 昌 大 學摘要II摘 要 摘 要黃曲霉毒素B1（AFB1）是已知毒性最強的真菌毒素，被世界衛(wèi)生組織癌癥機構列為Ⅰ類致癌物，許多國家制定了相應的法律法規(guī)限制農(nóng)產(chǎn)品中AFB1的含量以減少對

2、人和動物的危害。 本研究首次將量子點熒光微球作為標記探針應用于競爭免疫層析試紙條實現(xiàn)了對小分子物質(zhì)的檢測， 建立了基于FIT/FIC比值定量的AFB1量子點熒光微球免疫層析試紙條定量模型。本研究中所用商品化量子點熒光微球是通過摻雜CdSe/ZnS量子點所得，直徑為247 nm ±13 nm，同等摩爾數(shù)下量子點熒光微球的熒光強度是量子點的2863倍。 以量子點熒光微球為標記探針偶聯(lián)黃曲霉毒素B1單克隆抗體腹水制備了免疫層析試紙條

3、，試紙條的最佳工藝條件為：樣本墊處理液為pH 8.0的硼酸鈉緩沖液（含1.0% BSA、0.25% Tween-20和0.1% NaN3），每毫克量子點熒光微球的腹水蛋白質(zhì)標記量為150 µg，熒光微球腹水標記物所用體積為5 µL（36 μg/mL），T線抗原噴涂濃度為0.4 mg/mL，C線驢抗鼠二抗噴涂濃度為1.0 mg/mL。在此條件下探究了檢測樣品中pH、甲醇濃度以及試紙條判讀時間對試紙條免疫反應動力學的影響

4、。實驗結(jié)果表明基于FIT/FIC比值進行定量，在一定范圍內(nèi)有效消除了反應時間、溶液pH及甲醇濃度對試紙條反應動力學的影響。本方法所建立的AFB1量子點熒光微球免疫層析試紙條檢測模型的線性回歸方程為y = -0.28ln (x) +1.25（R2 = 0.9942），50%抑制濃度（IC50）為13.87 ± 1.54 pg/mL（n = 3），其靈敏度比量子點免疫層析試紙條方法學提高了39倍 （IC50 = 0.54 

5、7; 0.06 ng/mL）， 試紙條定量檢測范圍為5~60 pg/mL，表明該熒光試紙條具有較好的檢測性能。該試紙條與AFG1、AFG2、AFM1、AFB2的交叉反應率（Cr）分別為51.6%、0.2%、1.73%和5.58%，與桔霉素、展青霉素、赭曲霉毒素A、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮五種毒素交叉反應率均小于0.01%；試紙條檢測實際玉米樣品中黃曲霉毒素B1的最低檢測限為0.42 pg/mL；試紙條批內(nèi)檢測回收率在97.89%~105.

6、70%之間，批間回收率為96.32%~110.30%，且批內(nèi)批間檢測變異系數(shù)（CV）均在10%以內(nèi)。以上結(jié)果表明AFB1量子點熒光微球免疫層析試紙條具有良好的精密度和準確度。同時采用試紙條與ELISA商品試劑盒兩種方法隨機檢測40個玉米陰性加標樣本，結(jié)果表明二者具有良好的相關性（R2 = 0.9391）。采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）方法和試紙條對9份來源不同的谷物及飼料產(chǎn)品進行分析，數(shù)據(jù)表明兩種方法相關性很好。 以上結(jié)果