膠體金刺突長(zhǎng)度對(duì)赭曲霉毒素A免疫層析試紙條檢測(cè)性能影響的研究.pdf

1、本文初步探討了多枝狀膠體金刺突長(zhǎng)度對(duì)免疫層析試紙條檢測(cè)性能的影響。分別采用檸檬酸三鈉還原法和種子介導(dǎo)生長(zhǎng)法合成了無(wú)刺突球狀，短刺突多枝狀和長(zhǎng)刺突多枝狀三種膠體金，粒子粒徑均為30-40 nm；采用以上三種膠體金研制了赭曲霉毒素A（Ochratoxin A, OTA）的免疫層析試紙條；以試紙條T/C比值法建立了赭曲霉毒素A的試紙條定量檢測(cè)方法；系統(tǒng)評(píng)價(jià)以三種膠體金為探針時(shí)，每張?jiān)嚰垪l的抗體以及探針消耗量、50％的競(jìng)爭(zhēng)抑制濃度（Half m

2、aximal inhibitory concentration, IC50）、試紙條定量檢測(cè)的最低檢測(cè)限（Limit of detection, LOD）及所需的平衡反應(yīng)時(shí)間等指標(biāo)差異；并進(jìn)一步分析了三種金標(biāo)納米探針?lè)謩e與檢測(cè)線以及質(zhì)控線結(jié)合的動(dòng)力學(xué)變化。
　　制備三種試紙條的主要參數(shù)如下：NC膜檢測(cè)線上OTA-BSA濃度為1.2 mg/mL，質(zhì)控線二抗?jié)舛葹?.4 mg/mL；抗赭曲霉毒素A腹水標(biāo)記三種探針量（無(wú)刺突球狀、短刺突

3、多枝狀和長(zhǎng)刺突多枝狀）為4.5μg/mL；結(jié)合墊上三種金標(biāo)抗體納米探針的噴涂量分別為4.0μL/cm，2μL/cm和0.8μL/cm（保證T線顯色強(qiáng)度基本一致）。在此條件下，無(wú)刺突球狀、短刺突多枝狀及長(zhǎng)刺突多枝狀三種膠體金試紙條T/C比值進(jìn)入平衡的時(shí)間分別為17 min，15 min和12 min，表明長(zhǎng)刺突多枝狀膠體金在試紙條上具有更快的釋放速率和涌動(dòng)速率；平衡時(shí)三種試紙條T/C比值分別為0.67±0.03，0.95±0.01和1.2

4、9±0.02，以上數(shù)據(jù)顯示長(zhǎng)刺突多枝狀金納米粒子與T線抗原具有更強(qiáng)的結(jié)合能力；三種膠體金試紙條定量曲線采用四參數(shù)進(jìn)行模擬擬合，具體方程分別如下：y=145.6914/[1+(x/2.9255)-1.0554]-1.8735(R2=0.9903，無(wú)刺突球狀膠體金探針)，y=259.0171/[1+(x/5.4329)-0.7548]-1.1688(R2=0.9937，短刺突多枝狀膠體金探針)和y=226.9642/[1+(x/1.9879

5、)-1.0601]+0.0713(R2=0.9960，長(zhǎng)刺突多枝狀膠體金探針)，定性檢測(cè)閾值分別為5 ng/mL、3 ng/mL和2 ng/mL，IC50分別是1.68 ng/mL、0.84 ng/mL及0.61 ng/mL；LOD分別為0.29 ng/mL，0.1 ng/mL和0.07 ng/mL。其中，長(zhǎng)刺突多枝狀膠體金試紙條的定性檢測(cè)閾值、定量檢測(cè)的IC50和LOD分別是無(wú)刺突球狀膠體金試紙條的2.5、2.75和4.14倍。