糧谷中的黃曲霉毒素(B1、B2、G1、G2)和赭曲霉毒素A聯(lián)合檢測(cè)研究.pdf

1、黃曲霉毒素(AFT)和赭曲霉毒素(OT)是真菌毒素中毒性最大的兩類(lèi)毒素，1993年AFB1被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)列為一類(lèi)致癌物，赭曲霉毒素中的赭曲霉毒素A(OTA)則被列為二類(lèi)致癌物。AFT和OT不僅毒性強(qiáng)，而且污染范圍極廣，AFT對(duì)糧食和飼料的危害有不少報(bào)道，檢出率高達(dá)80％～100％，OT則被許多國(guó)家檢出大量污染糧食作物，更有資料表明AFT和OTA常常同時(shí)污染同一糧食作物，而且存在毒性的加性效應(yīng)，眾多國(guó)家和地區(qū)都已經(jīng)制定了A

2、FT和OTA嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。目前雖然AFT和OTA的分別測(cè)定方法已比較成熟，很多學(xué)者都做了大量的研究，但其分別測(cè)定成本較高，試劑損耗嚴(yán)重且測(cè)定耗時(shí)，工作量大。而對(duì)AFT和OT進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)可有效解決上述問(wèn)題，縮短分析時(shí)間，提高食品安全性。目前對(duì)食品、農(nóng)產(chǎn)品中AFT和OT等真菌毒素的單獨(dú)檢測(cè)方法主要有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法、熒光光度法、膠體金免疫層析法和高效液相色譜法等，但對(duì)其進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)的報(bào)道較少，雖有少數(shù)文獻(xiàn)建立了其聯(lián)合檢測(cè)方法，但

3、其方法成本高，設(shè)備昂貴，不能在一般實(shí)驗(yàn)室大面積推廣使用，因而受到限制。建立一套成本低，操作簡(jiǎn)便、快速、凈化效果好的AFT和OTA聯(lián)合檢測(cè)方法，運(yùn)用于糧食作物中的真菌毒素檢測(cè)，意義重大。
　　 本研究建立了糧谷中AFT和OTA的聯(lián)合檢測(cè)方法，樣品采用超聲波提取，液液萃取凈化，高效液相色譜-可變熒光波長(zhǎng)檢測(cè)器測(cè)定。同時(shí)對(duì)方法的準(zhǔn)確度，精密度，靈敏度和線性范圍等進(jìn)行研究，并與現(xiàn)行國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn)，主要結(jié)論如下：
　　 (1

4、)通過(guò)熒光分光光度計(jì)在200nm～700nm范圍內(nèi)全波段掃描，AFT的最大激發(fā)波長(zhǎng)360nm左右，最大發(fā)射波長(zhǎng)440nm左右；OTA最大激發(fā)波長(zhǎng)333nm左右，最大發(fā)射波長(zhǎng)477nm左右。經(jīng)過(guò)高效液相色譜-熒光檢測(cè)器檢測(cè)，AFT(衍生后)和OTA在液相色譜上有很強(qiáng)的熒光信號(hào)，而且每種毒素?zé)晒庑盘?hào)的峰面積和其對(duì)應(yīng)濃度都有良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)都在0.999以上，說(shuō)明通過(guò)液相色譜-熒光檢測(cè)器聯(lián)合檢測(cè)AFT和OTA是可行的。
　　

5、 (2)對(duì)提取過(guò)程中影響提取效果的各個(gè)因素進(jìn)行了研究。確定取樣量為5g時(shí)，可以滿(mǎn)足提取回收率的要求，達(dá)到80％以上的回收率，變異系數(shù)為10％以?xún)?nèi)；不同提取方式對(duì)固體樣品中AFT和OTA提取率影響很大，超聲波20℃處理20min時(shí)可以基本達(dá)到最大提取率，回收率在90％左右，檢測(cè)時(shí)間比國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)振蕩處理縮短了近30min；實(shí)驗(yàn)研究了提取劑的濃度，提取比對(duì)提取效果的影響，20mL80％甲醇溶液對(duì)5g樣品的提取率可以達(dá)到最大，回收率達(dá)到80％以

6、上；當(dāng)進(jìn)行液液萃取時(shí)，第一次萃取后仍有少量毒素殘留在水相中，萃取不完全，回收率低，當(dāng)二次萃取后回收率顯著升高，毒素已基本萃取完全，所以實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行多次萃取是必要的。
　　 (3)在玉米，大米，小麥三類(lèi)樣品中加標(biāo)回收率平均為71.73％～115.37％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.00％～9.88％：經(jīng)連續(xù)日間和日內(nèi)7次精密度實(shí)驗(yàn)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.00％～9.30％，根據(jù)3倍信噪比的峰響應(yīng)值，確定AFB1、AFB2、AFG1、AFG2和OT

7、A檢出限分別為0.06、0.03、0.18、0.05、0.51μg/kg，上述五種毒素分別在濃度0.05～100.00、0.125～25.00、0.05～100.00、0.125～25.00、0.05～50.00μg/L范圍內(nèi)成線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9995、0.9996、0.9998、0.9992和0.9998；方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，AFB1、AFB2、AFG1、AFG2和OTA聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果與現(xiàn)行國(guó)標(biāo)的單獨(dú)檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著