羥丙基透明質(zhì)酸的制備及性質(zhì)研究.pdf

1、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，HA)是由D-葡糖醛酸(GlcA)和N-乙酰氨基葡糖(GlcNAc)雙糖單位通過交替的β-1，3和β-1，4糖苷鍵連接而成的線性高分子酸性粘多糖。作為構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的主要成分，透明質(zhì)酸廣泛分布于皮膚、眼玻璃體、臍帶、軟骨及關(guān)節(jié)滑液等結(jié)締組織中，具有保濕、潤滑、營養(yǎng)、修復(fù)和預(yù)防損傷等生理功能，在維持組織完整性方面和促進(jìn)感染、損傷、胚胎發(fā)育過程中組織形成和重塑方面發(fā)揮重要作用。在化妝品、食

2、品及醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛。
　　研究發(fā)現(xiàn)，HA容易被體內(nèi)透明質(zhì)酸酶（hyaluronidase，HAase）降解，體內(nèi)留存時間短。研究者們期望通過對其進(jìn)行修飾，得到抗酶解的HA衍生物，延長體內(nèi)保留時間。而目前已經(jīng)上市的交聯(lián)HA，雖具有良好的抗酶解性質(zhì)，但缺少一定的潤滑性，不適于骨關(guān)節(jié)注射液，因此既具有抗酶解活性又具有潤滑性的HA衍生物成為研究和需求熱點(diǎn)。
　　HA可修飾的位點(diǎn)有羧基、羥基、乙酰氨基和還原末端。以環(huán)氧烷烴化

3、合物對HA的羥基進(jìn)行修飾，可得到羥烷基化透明質(zhì)酸。本文采用環(huán)氧丙烷對HA的羥基進(jìn)行修飾得到羥丙基透明質(zhì)酸(hydroxypropyl hyaluronic acid，HHA)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HHA既具有抗酶解性質(zhì)又具有良好潤滑性。本文研究了HHA的制備方法、理化穩(wěn)定性、抗降HAase降解的特性;考察了其細(xì)胞毒性并建立了HHA重要質(zhì)量指標(biāo)的檢驗(yàn)方法。研究內(nèi)容包括以下方面:
　　(1) HHA的制備工藝研究
　　對環(huán)氧丙烷、NaOH

4、的用量、反應(yīng)溫度進(jìn)行了考察，建立具有明顯抗酶解活性的、分子量較高、取代度較低的HHA的制備工藝。
　　(2) HHA理化穩(wěn)定性研究
　　以相近相對分子質(zhì)量(Mr)的HA作對照對HHA Mr的熱穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性、抗氧化穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，其熱穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性和抗氧化穩(wěn)定性與HA沒有明顯差異。
　　(3) HHA抗HAase降解穩(wěn)定性研究
　　通過比較樣品溶液黏度降低幅度對HHA的抗HAase降解穩(wěn)定性進(jìn)

5、行了研究，發(fā)現(xiàn)與HA相比，HHA具有明顯的抗HAase降解特性。
　　(4) HHA細(xì)胞毒性的研究
　　以相近分子量的HA作為對照，評價(jià)了HHA的細(xì)胞毒性。結(jié)果顯示，HHA的增殖速率及細(xì)胞形態(tài)較HA均沒有明顯變化，即兩者的細(xì)胞毒性沒有明顯差異。
　　(5)建立HHA的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
　　參考羥丙基淀粉取代度測定方法[1]，建立了采用分光光度法測定HHA取代度的方法。同時摸索了HHA的抗酶解活性檢測法、干燥失重、pH、運(yùn)