海洋水產(chǎn)品中縮醛磷脂的分離純化及活性探究.pdf

1、縮醛磷脂廣泛存在于哺乳動物或鳥類組織、血液、肌肉中，特別是腦組織中含量最高。由于sn-1位存在特殊的烯醚鍵結(jié)構(gòu)，縮醛磷脂具有諸多生理生化活性。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，在對各種人類疾病的發(fā)病機(jī)制和磷脂組學(xué)的研究中，縮醛磷脂的各種生理活性還在不斷發(fā)現(xiàn)和證實(shí)。除哺乳動物外，縮醛磷脂還存在于海參、貝類及海膽、海星等低等海洋生物中。本論文首先對常見的海洋貝類中縮醛磷脂的含量與組成進(jìn)行分析后，選擇縮醛磷脂含量較高且低值的貽貝為研究對象，探究其加工

2、過程中縮醛磷脂的變化，確定工業(yè)化提取縮醛磷脂的適宜前處理?xiàng)l件;之后，繼續(xù)探討以酶法和柱層析方法分別提取純化貽貝及冰島刺參中縮醛磷脂的最佳工藝條件，使用所建立方法提取得到貽貝、冰島刺參及牛腦中縮醛磷脂及醚磷脂共5種純品;最后對五種磷脂體外抗氧化損傷作用作出探究。
　　海洋貝類中縮醛磷脂存在廣泛，所研究的6種貝類中均含有其縮醛型磷脂酰乙醇胺(pPE)與醚型磷脂酰膽堿(aPC)，且含量普遍較高，其中aPC百分含量最高的是紅螺，其次為貽貝

3、，而縊蟶中含量最低。pPE占總PE的百分比普遍略低于aPC占PC的百分含量，其中含量最高的是毛蚶和貽貝，其次是縊蟶和紅螺，而櫛孔扇貝與菲律賓簾蛤的pPE含量較低。整體來看，貽貝是6種貝類中aPC與pPE含量均較高的一種，分別占總PC和PE的38.79％與24.29％。pPE中主要分子種有p18∶0/20∶5、p18∶0/22∶2和p20∶1/22∶6，而aPC含量較高的分子種是a16∶0/22∶6及a16∶0/22∶5。同時，貝類也是良

4、好的PUFA來源，特別是DHA與EPA型磷脂含量豐富。主成分分析(PCA)可以較好地依據(jù)磷脂組成分析多種生物樣品的差異，且直觀地反映在二維圖中，并能夠通過對變量貢獻(xiàn)的分析篩選得到主要差異分子種，是快速有效的差異分析手段。經(jīng)分析后，選用本地常見貝類中富含縮醛磷脂與醚磷脂且低值、易養(yǎng)殖的貽貝是作為最合適的原料，提取純化并進(jìn)一步探究縮醛磷脂的生物活性。
　　貽貝中pPE不僅含量較pPC含量高，且表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性，經(jīng)過煮熟、微波、熱風(fēng)及

5、冷風(fēng)干燥方式加工后，縮醛磷脂含量只有少量減少。煮熟和熱風(fēng)干燥加工的損失相對明顯，約損失15％～20％，微波干燥及冷風(fēng)干燥對縮醛磷脂的破壞并不嚴(yán)重，同時PUFA含量基本保持穩(wěn)定，故選用冷風(fēng)干燥為原料處理方式。在使用磷脂酶A1水解法富集pPE時，通過單因素條件實(shí)驗(yàn)，最終確定采用16 ml/g（正己烷/緩沖液=1/1，v/v）的反應(yīng)體系體積，加酶量為8倍質(zhì)量，在50℃下反應(yīng)4h為富集pPE最佳工藝條件。柱層析提取磷脂時首先選用2倍體積冷丙酮來

6、沉淀磷脂，在進(jìn)一步純化縮醛磷脂時，分別使用5倍柱體積氯仿及3倍柱體積氯仿/甲醇(9/1，v/v)洗脫硅膠柱后最終使用3倍體積甲醇洗脫可收集得到純度較高(97.11％)的磷脂，繼續(xù)使用氯仿/甲醇/水(60/35/8，v/v/v)與氯仿/甲醇(2/3，v/v)梯度洗脫，最終PE與PC純度均可以達(dá)到99.42％。最后，實(shí)驗(yàn)研究柱層析法直接分離PE中pPE的方法，發(fā)現(xiàn)正己烷/異丙醇/水的流動相體系在二醇基鍵合硅膠填料對普通PE與縮醛型PE具有一

7、定的分離趨勢，可以收集得到純度約為90％的縮醛磷脂及醚磷脂。
　　實(shí)驗(yàn)最后考察了使用前幾章所建立的方法提取純化的5種縮醛磷脂及醚磷脂的受試物的體外抗氧化損傷效果?？s醛磷脂對H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷具有顯著的保護(hù)作用，縮醛磷脂及醚磷脂均可以抑制細(xì)胞內(nèi)ROS的積累，提高細(xì)胞內(nèi)T-AOC和SOD活性，從而降低了H2O2對細(xì)胞的氧化損傷，且海洋來源磷脂效果優(yōu)于陸地來源，pPE效果優(yōu)于aPC?？s醛磷脂在被吸收利用的過程中，其烯醚鍵結(jié)