棉酚對細毛羊睪丸間質細胞和精液品質影響的研究.pdf

1、目的：棉酚在動物體內蓄積到一定的程度，對動物機體產(chǎn)生中毒危害現(xiàn)象，從而影響生長發(fā)育和繁殖能力！飼喂棉籽殼后檢測對雄性細毛羊的精液品質；分離出睪丸細胞，在體外進行培養(yǎng)，加入不同梯度棉酚對細胞的影響,查明在什么劑量下棉酚誘導細毛羊睪丸間質細胞發(fā)生凋亡和產(chǎn)生細胞毒性作用。
　　 方法：本論文分兩大部分，
　　 第一部分做棉酚對細毛羊睪丸間質細胞的影響研究，具體通過：1.細毛羊睪丸間質細胞的分離培養(yǎng)和鑒定。2.MTT法檢測棉酚對

2、睪丸間質細胞的增值的抑制作用。3.細毛羊睪丸間質細胞經(jīng)棉酚處理對乳酸脫氫酶和Na-K-ATP酶的影響。4.Heochst33342/PI試劑盒檢測對細毛羊睪丸間質細胞的影響。5.凝膠電泳檢測DNA Ladder。6.流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期。第二部分做飼喂棉籽殼（含有不同濃度的游離棉酚）對細毛羊精液品質的影響研究。
　　 結果：MTT法檢測棉酚對睪丸間質細胞的增值的抑制作用，1,左旋棉酚的作用：睪丸間質細胞增值隨著棉酚濃

3、度的增加及作用時間的延長而明顯變化。256、512mg/l左旋棉酚作用24小時后能顯著抑制間質細胞的增值（P＜0.5），作處理48小時64、128、256、512mg/l能顯著抑制間質細胞的增值（P＜0.5），處理72小時只有512mg/l起到顯著抑制作用。2，消旋棉酚的作用：處理時間段也分三個，24、48、72，只有48小時64、128、256、512mg/l濃度的消旋棉酚對細毛羊睪丸間質細胞起到顯著的抑制作用（P＜0.5），其他兩個

4、時間段都沒有顯著作用，但從數(shù)據(jù)上看，也起到一定的抑制作用。
　　 左旋棉酚和消旋棉酚接觸細胞24h后，高濃度組棉酚對細胞內Na-K-ATP酶影響差異顯著（P<0.05）。
　　 Heochst33342/PI試劑盒檢測結果，不同濃度消旋棉酚對睪丸間質細胞處理48小時后，隨著棉酚的濃度的增加，壞死細胞的數(shù)量也跟著增加。
　　 凝膠電泳檢測DNA Ladder，經(jīng)不同濃度的消旋棉酚處理72小時后，提取DNA進行電泳分

5、析?？梢?％DMSO對照組及消旋棉酚處理組的細胞沒有出現(xiàn)梯狀帶型，但256mg/l、512mg/l組得基因組DNA含量明顯高于低劑量組（P<0.05）。
　　 流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期。消旋棉酚作用于新疆細毛羊睪丸間質細胞后觀察到細胞周期改變，主要表現(xiàn)為S期細胞減少，G0/G1期細胞比例增加。256mg/l消旋棉酚作用48h時可見S期細胞比例明顯降低，同時G0/G1期細胞比例明顯增加，細胞進入增殖期減少，DNA合成速度減

6、慢，細胞被阻滯于G0/G1期。64mg/l消旋棉酚作用48h同樣出現(xiàn)上述改變，而4mg/l消旋棉酚對細毛羊睪丸間質細胞的周期沒有明顯影響。醋酸棉酚在抑制細毛羊睪丸間質細胞生長增殖同時觀察到上述細胞周期改變，其抑制間質細胞增殖的機制可能與對間質細胞細胞周期的調控作用有關。
　　 第二部分做棉酚對細毛羊精液品質的影響研究
　　 實驗一組即飼喂0.5kg棉籽殼（含游離棉酚218mg）和試驗二組即飼喂1kg棉籽殼（含游離棉酚43

7、6mg）公羊的精子活力,活精子率，pH值，與對照組(不喂棉籽殼)相比都有降低，但試驗一組與對照組差異不顯著（P>0.05），試驗二組與對照組差異顯著（P<0.05）。而在射精量，精子密度兩指標上試驗一組都高于對照組和試驗二組，特別是在精子密度上，試驗一組顯著高于對照組和試驗二組（P<0.05）。
　　 結論：不同濃度及不同時間消旋棉酚和左旋棉酚對新疆細毛羊睪丸間質細胞的作用后的數(shù)據(jù)來看，消旋棉酚和左旋棉酚能抑制細胞的生長存活，且