中醫(yī)“下法”療法促進(jìn)小鼠腸道菌群的平衡及其機(jī)制.pdf

1、隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展，民眾的生活方式也逐漸發(fā)生著改變。飲食不節(jié)，久臥久坐，七情所傷，臟腑氣機(jī)失調(diào)，進(jìn)而生熱化火。長(zhǎng)期便利的生活以及現(xiàn)代飲食的“富營(yíng)養(yǎng)化”，使得機(jī)體自調(diào)節(jié)功能弱化，肥胖、高血脂、高血壓、糖尿病等代謝性疾病逐年增多，從而改變了人體的內(nèi)環(huán)境，破壞了腸道菌群的平衡。菌群平衡的改變又進(jìn)一步使病情惡化而進(jìn)入惡性循環(huán)。
　　中醫(yī)“下法”為中醫(yī)八法之一，通過瀉下通便從而達(dá)到治療目的的一種方法，主要為里實(shí)證而設(shè)立。“下法”目前廣泛

2、應(yīng)用于臨床，上至急重癥，下至濕熱雜癥，均能得到有效緩解。本研究擬利用中醫(yī)“下法”原理，通過快速排除腸道致病菌，降低濕熱，為恢復(fù)腸道菌群的平衡提供環(huán)境條件。
　　目的:
　　通過“膏粱厚味”方式誘導(dǎo)昆明小鼠建立飲食不節(jié)，積久化熱，實(shí)火內(nèi)盛動(dòng)物模型，探索中醫(yī)“下法”治療對(duì)腸道菌群重構(gòu)速度以及腸黏膜屏障的影響，進(jìn)而從腸道菌群恢復(fù)平衡的角度為中醫(yī)“下法”原理提供微生態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　將60只昆明雌性小鼠，隨機(jī)分

3、成2組，健康組18只，高脂組42只。分別使用普通鼠糧與高脂鼠糧進(jìn)行喂養(yǎng)，同時(shí)高脂鼠糧組給予瓜子等雜食。4周后各組隨機(jī)處死小鼠6只，采集腸黏膜組織，利用PCR-DGGE（變性梯度凝膠電泳）與基因測(cè)序技術(shù)分析兩組小鼠腸黏膜上定植菌群差異，同時(shí)采集血清樣本進(jìn)行血脂四項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)，確定動(dòng)物模型的成功建立。隨后將高脂鼠糧組隨機(jī)分成3組，分別使用中藥番瀉葉，西藥酚酞片和生理鹽水進(jìn)行藥物干預(yù)處理，12小時(shí)后，將藥物干預(yù)組小鼠的高脂鼠糧全部替換成普通鼠糧

4、繼續(xù)喂養(yǎng)，同時(shí)每組隨機(jī)處死6只小鼠。取結(jié)腸組織以及周圍結(jié)腸黏膜組織，之后通過HE染色結(jié)果觀察藥物干預(yù)處理后小鼠結(jié)腸形態(tài)學(xué)的改變，利用Western Blotting檢測(cè)小鼠結(jié)腸黏膜二胺氧化酶(DAO)表達(dá)水平，并結(jié)合Real-time PCR、免疫組化技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸黏膜緊密連接蛋白表達(dá)水平，以此論述中醫(yī)“下法”對(duì)腸道通透性以及腸黏膜屏障功能的影響。4日后，處死所有剩余實(shí)驗(yàn)小鼠，收集腸黏膜組織，再次分析各組小鼠腸黏膜上菌群差異情況，并收集血

5、清樣本進(jìn)行血脂四項(xiàng)的檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1、高脂鼠糧輔以雜食喂養(yǎng)4周后，與健康對(duì)照組相比，小鼠毛色油膩、成綹，反應(yīng)力弱，體重、血脂四項(xiàng)結(jié)果顯著增長(zhǎng)，脂體系數(shù)出現(xiàn)明顯差異（P＜0.01），與胃腸積熱實(shí)火癥臨床指征具有某種程度上的對(duì)應(yīng)性，故可確定該動(dòng)物模型建造成功。
　　2、使用中藥番瀉葉與西藥酚酞片攻下，腹瀉率為100％、33.3％，稀便率分別為87.6％、8.6％。結(jié)腸黏膜緊密連接蛋白ZO-1與Occludin的基

6、因與蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示與正常組相比，番瀉葉組、生理鹽水組和酚酞組二者基因與蛋白的表達(dá)水平顯著減少(P＜0.01)，而酚酞組與番瀉葉組、生理鹽水組相比，二者的表達(dá)量也顯著減少（P＜0.01）。檢測(cè)結(jié)腸黏膜DAO的蛋白含量，結(jié)果也與上述一致。
　　3、PCR-DGGE分析16S rRNA基因指紋圖譜顯示，藥物干預(yù)治療前，與正常對(duì)照組相比，高脂組小鼠部分菌群缺失，且厚壁菌門增加明顯;經(jīng)藥物攻下并輔以健康飲食4天后，擬桿菌門紫單孢菌（