不同泌乳期中國漢族人乳類固醇組學(xué)分析.pdf

1、人乳是嬰兒最理想的天然營養(yǎng)食品，能夠滿足嬰兒生長發(fā)育的營養(yǎng)需求。人乳由于具有優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)、脂肪、多種礦物質(zhì)和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，其能夠有效促進(jìn)嬰兒生長發(fā)育，健全嬰兒神經(jīng)系統(tǒng)，同時(shí)增強(qiáng)嬰兒免疫力。人乳因其獨(dú)特的優(yōu)越性而被世界衛(wèi)生組織推薦作為最適合0～6個(gè)月嬰兒喂養(yǎng)的優(yōu)質(zhì)食物。人乳中含有3％～5％的脂質(zhì)，其被認(rèn)為是提供嬰兒能量和營養(yǎng)的重要物質(zhì)之一。脂質(zhì)主要由甘油三酯、磷脂、鞘脂和類固醇等組成。雖然類固醇占脂質(zhì)成分的比例不高，但它在嬰兒生長發(fā)育

2、的過程中起到重要的作用。
　　類固醇的主要組成成分為膽固醇與類固醇激素。膽固醇對(duì)于嬰兒器官的生長發(fā)育與成熟，尤其對(duì)大腦和神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育是必不可少的。類固醇激素對(duì)嬰兒體內(nèi)的代謝和性別的開發(fā)與促進(jìn)起重要的調(diào)節(jié)作用。隨著對(duì)激素逐漸深入的研究，激素的攝入是否會(huì)引起兒童性早熟或雄性特征退化等問題備受關(guān)注。目前，大部分中國嬰兒家庭由于各種原因不能采取母乳喂養(yǎng)，需要給予嬰兒配方奶粉喂養(yǎng)。嬰兒配方奶粉的成分與母乳標(biāo)準(zhǔn)的組成成分之間的差異決定了嬰兒

3、生長發(fā)育需要是否得到滿足。因此，分析中國人乳的組成成分對(duì)嬰兒配方奶粉成分規(guī)范化，使其更加接近人乳組成尤為重要。脂質(zhì)組學(xué)是針對(duì)所有生物體內(nèi)的脂質(zhì)進(jìn)行的系統(tǒng)化的全面分析，以確定理解脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，并揭示脂質(zhì)代謝和細(xì)胞、組織、器官甚至是機(jī)體的生理和病理過程之間的緊密聯(lián)系。類固醇組學(xué)研究屬于脂質(zhì)組學(xué)研究的一個(gè)分支，是針對(duì)脂質(zhì)中的類固醇物質(zhì)進(jìn)行全面分析。本研究建立類固醇組學(xué)方法對(duì)中國東北地區(qū)采集的來自于15位乳母的總計(jì)37個(gè)初乳期（1～5天）、

4、過渡乳期（6～20天）和成熟乳期（21天以后）的人乳樣品進(jìn)行初步探索階段的絕對(duì)定量分析并對(duì)其組成在泌乳期期間的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行大體上的研究。
　　(1)本研究應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)分析中國東北地區(qū)不同泌乳期人乳中膽固醇含量及其在泌乳期期間的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)。樣品經(jīng)KOH-乙醇溶液皂化后，用乙醚-石油醚混合液萃取，經(jīng)過無水Na2SO4脫水，氮吹濃縮。采用Agilent DB-5ms(30 m×0.25 mm，0.25μm)毛細(xì)管

5、色譜柱分離，GC-MS定量分析。應(yīng)用Agilent氣相色譜工作站和Agilent質(zhì)譜工作站對(duì)色譜與質(zhì)譜圖進(jìn)行分析得到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，本方法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度好的特點(diǎn)。應(yīng)用SPSS17.0軟件對(duì)各泌乳期膽固醇含量進(jìn)行差異分析，各泌乳期膽固醇含量差異顯著(P＜0.05)。初乳期膽固醇含量最高，平均含量達(dá)到202.81±3.72 mg/L，隨著泌乳期的延長，膽固醇含量急速下降，在過渡乳期和成熟乳期人乳中平均含量分別為171.19±3.2

6、4 mg/L和123.95±3.12 mg/L，成熟乳期膽固醇含量基本穩(wěn)定。對(duì)該方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，加標(biāo)回收率達(dá)到94％以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4％以下，方法檢出限為0.15 mg/L，定量限為0.52 mg/L。
　　(2)本研究應(yīng)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)分析中國東北地區(qū)人乳中9種類固醇激素。人乳樣品經(jīng)β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解后，用乙腈提取，經(jīng)過固相萃取柱凈化和濃縮后，應(yīng)用Acquity UPL

7、C XDB C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm）對(duì)類固醇激素分離，利用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式(MRM)進(jìn)行掃描。應(yīng)用AB analyst質(zhì)譜工作站對(duì)實(shí)驗(yàn)得到的色譜與質(zhì)譜圖進(jìn)行分析得到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，在0.1～20 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2＞0.99，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.89～4.02％之間，方法的檢出限在0.10～0.25 ng/mL之間，定量限在0.33～0.86 ng/mL之間，方法具有良好的靈敏度和準(zhǔn)確度

8、。應(yīng)用SPSS17.0軟件對(duì)各泌乳期的9種類固醇激素含量進(jìn)行差異分析。雌二醇和睪酮在三段泌乳期內(nèi)人乳中的含量有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，雌酮、雌三醇、孕酮、雄酮和雄烯二酮均在初乳期與另外兩段泌乳期中的含量有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。過渡乳期和成熟乳期可的松含量有顯著差異(P＜0.05)。除可的松、雄酮與脫氫表雄酮之外，其他6種類固醇激素含量都是隨泌乳期的延長逐漸降低?？傻乃珊侩S泌乳期的延長先上升后下降，雄酮反之。脫氫表