中國漢族人群氨氯地平PK-PD的藥物基因組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　1.研究POR常見多態(tài)基因A503V的多態(tài)性對CYP3A體內(nèi)活性的影響;
　　2.研究POR A503V基因多態(tài)性對中國漢族健康志愿者體內(nèi)氨氯地平藥代動力學(xué)的影響;
　　3.研究中國漢族健康志愿者血漿中miR-34a的水平與氨氯地平體內(nèi)藥代動力學(xué)參數(shù)間的相關(guān)性，探討微小RNA在人體氨氯地平藥代動力學(xué)個體差異中的作用及可能機(jī)制;
　　4.在中國漢族高血壓患者中研究POR、CYP3A4、CYP3A5和MD

2、R1四種基因的遺傳多態(tài)性對氨氯地平藥代動力學(xué)及藥物效應(yīng)的影響;
　　5.應(yīng)用定量藥理學(xué)方法，研究遺傳因素和環(huán)境因素對氨氯地平干預(yù)中國漢族高血壓患者的藥代及藥效動力學(xué)的影響，建立PK/PD數(shù)學(xué)模型。
　　方法：
　　1.POR常見多態(tài)基因A503V的多態(tài)性對CYP3A體內(nèi)活性的影響研究采用PCR產(chǎn)物直接測序法在中國漢族男性健康志愿者中對POR常見多態(tài)基因A503V進(jìn)行分型，并根據(jù)基因分型結(jié)果隨機(jī)篩選22名健康受試入組者。

3、隨機(jī)將受試者分成兩組，每組11人。臨床試驗分為三個周期，每周期間洗脫期7天。兩組受試者于前兩周期內(nèi)分別靜脈注射咪達(dá)唑侖注射液5 mg或空腹口服咪達(dá)唑侖7.5 mg，于第三周期統(tǒng)一單次口服苯磺酸氨氯地平片5 mg（為第二部分研究內(nèi)容），并在給藥前后采集系列血樣標(biāo)本。所有藥物在空腹12小時后晨起給予。采用HPLC-MS/MS法測定血漿中咪達(dá)唑侖(MID)和1-羥咪達(dá)唑侖(1-OH MID)的濃度，應(yīng)用DAS2.0軟件對藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行計算

4、。以1-羥咪達(dá)唑侖與咪達(dá)唑侖血藥濃度-時間曲線下面積比值(AUC1-OH-MID/AUCMID)和咪達(dá)唑侖1h的代謝率(MR)作為反應(yīng)體內(nèi)CYP3A活性的指標(biāo)。采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，各組之間主要藥代動力學(xué)參數(shù)的差異采用單因素方差分析或配對-t檢驗進(jìn)行比較。
　　2.健康中國漢族男性志愿者中POR A503V基因多態(tài)性對氨氯地平體內(nèi)的藥代動力學(xué)的影響
　　臨床試驗同第1部分。采用HPLC-MS/MS法測定氨氯地平

5、的血藥濃度并應(yīng)用DAS2.0軟件對藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行計算。采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，并進(jìn)行配對t檢驗或單因素方差分析比較PORA503V各基因型CC組、CT組及TT組之間主要藥代動力學(xué)參數(shù)的差異。
　　3.中國漢族男性健康志愿者血漿中miR-34a表達(dá)水平與氨氯地平體內(nèi)藥代動力學(xué)的相關(guān)性研究
　　利用第2部分氨氯地平的血藥濃度數(shù)據(jù)和血漿樣本，通過real time定量PCR方法測定服藥前(0h)血漿中miR-34a

6、人體內(nèi)的表達(dá)量。采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，用獨立樣本t檢驗和非參數(shù)相關(guān)性分析方法來評價miR-34a人體內(nèi)表達(dá)量與氨氯地平藥代動力學(xué)的相關(guān)性。
　　4.中國漢族高血壓患者中POR、CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多態(tài)性對氨氯地平藥代動力學(xué)及降壓效應(yīng)的影響
　　篩選中國漢族輕中度原發(fā)性高血壓患者，采用測序方法對PORA503V、CYP3A4*1G、CYP3A5*3、MDR1C3435T四種基因進(jìn)行分型。所有患

7、者經(jīng)過一周安慰劑洗脫后，符合試驗方案并愿意繼續(xù)參與試驗的受試者連續(xù)口服苯磺酸氨氯地平4周，每天1次，每次5mg。在第4周最后一次給藥前（第28天）及給藥后2h、6h、24h各采集外周靜脈血5ml，并測量記錄治療前后的血壓。采集血、尿生物標(biāo)本進(jìn)行實驗室檢查，同時觀察和記錄不良反應(yīng)發(fā)生情況。利用HPLC-MS/MS法測定氨氯地平的血藥濃度。通過SPSS13.0對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，經(jīng)單因素方差分析或配對-t檢驗比較PORA503V、CYP3A

8、4、CYP3A5、MDR1各基因型之間主要藥代動力學(xué)和藥效之間的差異。
　　5.氨氯地平干預(yù)中國漢族高血壓患者的遺傳及環(huán)境因素的PK/PD定量藥理學(xué)研究
　　采用第4部分的臨床試驗數(shù)據(jù)建立數(shù)據(jù)庫。使用NONMEM7.2軟件并基于FOCEI方法對氨氯地平的數(shù)據(jù)進(jìn)行群體藥動學(xué)(PPK)建模和群體藥效學(xué)(PPD)建模。
　　結(jié)果：
　　1.POR常見多態(tài)基因A503V的多態(tài)性對CYP3A體內(nèi)活性的影響研究
　　2

9、2位受試者入組參與了臨床試驗，其中TT基因型型7名、CT基因型型8名， CC基因型型7名，三種基因型個體在年齡、身高、體重方面均無顯著性差異。靜脈注射咪達(dá)唑侖后， TT基因型組1-羥基咪達(dá)唑侖的AUC0-t明顯高于CC基因型組(p=0.026)，TT組1-羥基咪達(dá)唑侖Cmax顯著高于CC組(p=0.001)和CT組(p=0.002);口服咪達(dá)唑侖后三基因組間的主要藥代動力學(xué)參數(shù)無統(tǒng)計學(xué)意義。以1-OH-MID AUC0-8/MID AU

10、C0-t為評價指標(biāo)時，靜脈注射和口服咪達(dá)唑侖后，TT基因型組的CYP3A酶的活性較其他基因型組相比較有升高的趨勢，但差異未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義。而以咪達(dá)唑侖1h代謝率(MR)為評價指標(biāo)時，靜脈注射咪達(dá)唑侖后，三組間咪達(dá)唑侖MR存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異(ANOVA，p=0.032); TT基因型組與MR顯著高于CT基因型組(p=0.010)和CC基因型組(p=0.031）;口服咪達(dá)唑侖后，各基因型間MR無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2.中國漢族健康男性志

11、愿者中POR A503V多態(tài)性對氨氯地平體內(nèi)藥代動力的影響
　　22位受試者口服5 mg苯磺酸氨氯地平片后，POR A503V CC基因型組、CT基因型組及TT基因型組的藥代動力學(xué)參數(shù)Tmax分別為(5.43±3.21)h、（4.88±1.55）h和（4.57±1.51）h;AUC0-96分別為（154.76±15.58）ng/mL/h、(126.41±37.88)ng/mL/h和(141.49±31.46) ng/mL/h; C

12、max分別為（4.87±0.99）ng/mL、（3.93±1.08）ng/mL和（5.47±0.91）ng/mL;t1/2分別為（38.94±15.81）h、（41.24±17.35）h和（33.66±13.19）h。對三組間氨氯地平的藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行單因素分析顯示，三組間Cmax的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.025)，TT基因型組Cmax顯著高于CC基因型組(p=0.008)，三組間其余藥代動參數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3.中國漢

13、族健康男性志愿者血漿中miR-34a水平與氨氯地平體內(nèi)藥代動力學(xué)間的相關(guān)性研究
　　通過提取血漿中miRNA，成功完成21位受試者血漿miR-34a人表達(dá)水平的半定量測定（1位志愿者血漿RNA提取和檢測失?。?。根據(jù)血漿miR-34a的水平分為血漿miR-34a高水平組（高于中位數(shù)，n=11）與低水平組（低于中位數(shù)，n=10）的氨氯地平藥代動力學(xué)參數(shù)Cmax分別為(4.62±1.02) ng/mL和(4.65±1.32) ng/mL

14、，AUC0-96分別為（151.61±28.67）ng/mL/h和（129.75±32.48）ng/mL/h，兩組間經(jīng)獨立樣本t檢驗無統(tǒng)計學(xué)差異。分別對氨氯地平Cmax和AUC0-96與miR-34a表達(dá)水平進(jìn)行非參數(shù)相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)r分別為-0.215、-0.385，呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)趨勢，但相關(guān)性無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.中國漢族高血壓患者中POR、CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多態(tài)性對氨氯地平藥代動力學(xué)及降壓療效的影

15、響
　　本研究共篩選了157例高血壓患者，其中106進(jìn)入洗脫期，67例入組進(jìn)入氨氯地平治療期，60例（男31人，女29人）完成4周治療和隨訪及PK研究。治療4周后坐位舒張壓相對基線的變化絕對值為(7±6)mmHg，坐位收縮壓相對基線的變化值為(18±10) mmHg，降壓有效者32人，有效率53.3％。POR A503V、CYP3A4*1G、CYP3A5*3、MDR1C3435T四種基因的多態(tài)性中除MDR1多態(tài)性對氨氯地平血藥濃度

16、具有一定影響外，其余三種多態(tài)性對氨氯地平血藥濃度和療效均無顯著性影響。
　　5.氨氯地平干預(yù)中國漢族高血壓患者的遺傳及環(huán)境因素的PK/PD定量藥理學(xué)研究
　　建立的群體藥動學(xué)(PPK)模型和群體藥效學(xué)(PPD)模型經(jīng)驗證穩(wěn)定、準(zhǔn)確。性別和MDR1基因多態(tài)性對清除率(CL/F)具有影響，總蛋白(TP)對清除率CL/F具有一定影響。氨氯地平的濃度-效應(yīng)的最終模型的收縮壓變化值與氨氯地平給藥后達(dá)到穩(wěn)態(tài)時的0-24小時藥時曲線下面積

17、(AUC0-24)呈正相關(guān)，AUC0-24越大，則收縮壓降低值越大。
　　結(jié)論：
　　1.POR A503V基因多態(tài)性可導(dǎo)致中國漢族男性健康志愿者肝臟CYP3A酶活性增加;
　　2.POR A503V多態(tài)性對中國漢族男性健康志愿者氨氯地平藥代動力學(xué)影響不顯著，POR A503V多態(tài)性對氨氯地平的吸收可能存在影響;
　　3.血漿中miR-34a的水平與中國漢族人群男性健康志愿者口服氨氯地平的藥代動力學(xué)參數(shù)相關(guān)性不顯

18、著;
　　4.中國漢族原發(fā)性高血壓患者應(yīng)用氨氯地平降壓治療，女性患者口服氨氯地平后其血漿藥物濃度高于男性，CL/F低于男性，但氨氯地平的降壓療效無顯著性別差異;
　　5.高血壓患者M(jìn)DR1 C3435T突變純合子個體氨氯地平的血漿清除率升高，但該位點突變對氨氯地平的降壓療效影響不明顯;
　　6.POR*28, CYP3A4*1G，CYP3A5*3基因多態(tài)性對氨氯地平藥代動力學(xué)及降壓療效雖有一定的影響趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義