殼寡糖誘導(dǎo)交鏈孢菌細胞凋亡及毒素抑制的研究.pdf

1、殼寡糖是一種水溶性低聚糖，具有良好的生物兼容性，可生物降解并對人畜無毒，其抑菌活性在植物病害防治、食品防腐以及醫(yī)療等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。目前對殼寡糖作用機理的研究主要集中于其誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性方面，在殼寡糖抑制病原真菌機理方面還報道較少。交鏈孢菌是侵染范圍很廣的一種侵染性真菌，在造成危害的同時，產(chǎn)生多種真菌毒素，采后番茄果實可受其侵染而發(fā)生黑霉病。
　　本論文首先研究不同濃度的殼寡糖對菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制現(xiàn)象，從而確定寡糖

2、對交鏈孢菌的生物學影響。結(jié)果表明，500μg/mL的殼寡糖抑菌效果最明顯，對菌絲生長的抑制率達到55.56％，對孢子萌發(fā)的抑制率達到78％。掃描電鏡觀察不同濃度的殼寡糖對交鏈孢菌絲和孢子均有破壞作用，處理組菌絲體管狀形態(tài)模糊，表面粗糙，甚至出現(xiàn)菌絲消融狀態(tài)。同樣處理組孢子破裂，完全變形，出現(xiàn)原生質(zhì)溢出現(xiàn)象。
　　其次通過對殼寡糖誘導(dǎo)交鏈孢菌的細胞凋亡過程進行研究，發(fā)現(xiàn)殼寡糖對交鏈孢菌原生質(zhì)體有致死作用。熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明，殼寡

3、糖處理組線粒體膜電位下降，ROS水平顯著增高。在激光共聚焦顯微鏡下觀察殼寡糖與交鏈孢菌絲和孢子的結(jié)合，發(fā)現(xiàn)菌絲體和孢子整體熒光染色較均勻，但是在菌絲隔膜處出現(xiàn)熒光斷裂現(xiàn)象，隔膜未被染色，表明殼寡糖可能進入細胞內(nèi)部與其DNA結(jié)合，凝膠阻滯作用驗證結(jié)果進一步證實了該結(jié)論。
　　以體外提取交鏈孢菌毒素的方法研究殼寡糖與致病毒素的相互作用表明，殼寡糖處理組細胞存活率基本不受影響，而毒素處理組大部分均出現(xiàn)質(zhì)壁分離現(xiàn)象和死亡現(xiàn)象，且存活率＜5