低溫脂肪酶生產菌篩選、基因克隆及其在大腸桿菌中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、脂肪酶（甘油酯水解酶，EC3.1.1.3）是一種特殊的甘油三酯水解酶，不僅能催化甘油三酯水解為甘油和脂肪酸，還能水解酯類，促進酯交換和酯合成。在藥物合成、食品加工、洗滌劑和化妝品等行業(yè)領域都得到了廣泛應用。
　　采用羅丹明B平板透明圈法對不同來源的樣品進行篩選，共獲得55株脂肪酶生產菌株，其中菌株LHY-1具有生長速度快、在低溫條件下產酶量高且穩(wěn)定的特點。菌株LHY-1的16S rDNA序列與嗜線蟲沙雷氏菌（Serratia ne

2、matodiphila）、粘質沙雷氏菌（Serratia marcescens）、深紅沙雷氏菌（Serratia rubidaea）、無花果沙雷氏菌（Serratia ficaria）序列相似性分別為99％、99％、98％、98％，根據生理生化分析，初步鑒定LHY-1為沙雷氏菌（Serratia sp.）。
　　對沙雷氏菌（Serratia sp.）LHY-1的生長和產酶條件進行優(yōu)化。菌株在前10h生長迅速，10h后進入穩(wěn)定期，最

3、佳產酶時間為16h。最適生長和最佳產酶的碳源和氮源分別是牛肉膏、酵母粉。在10℃-40℃生長良好，最佳產酶溫度為20℃。在初始pH為4.0-10.0范圍內生長良好，最佳產酶初始pH為7.0。該菌有著很高的耐鹽度，鹽度為9％時還生長，但最佳產酶的鹽度為0。最適生長和最適產酶的裝液量為30mL。
　　對沙雷氏菌（Serratia sp.）LHY-1的脂肪酶基因克隆和表達，重組脂肪酶用Ni瓊脂糖親和柱純化和SDS-PAGE檢測，該重組脂

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