2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、通過(guò)因特網(wǎng)從Genebank中找到Tth DNA聚合酶基因序列,利用Pinmer4軟件對(duì)其內(nèi)切酶位點(diǎn)進(jìn)行分析,并設(shè)計(jì)了兩組引物進(jìn)行PCR,分段克隆該基因,用PstI分別對(duì)PCR產(chǎn)物酶解,結(jié)果所得的DNA片段與計(jì)算機(jī)分析的完全一致.分別把兩個(gè)片段過(guò)接到pGEM-T質(zhì)粒上得pJYQ-T1和pJYQ-T2質(zhì)粒,用AflⅡ和SalI分別酶切pJYQ-T1,pJYQ-T2,回收純化所需片段進(jìn)行連接,拼接成完整的TthDNA聚合酶基因,得到質(zhì)粒pJ

2、YQ-T3.以pJYQ-T3為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增得TthDNA聚合酶基因.以Bg1Ⅱ和EcoRI酶切PCR產(chǎn)物,以BamHI和EcoRI酶切pET-5a,用T4 ligase把該基因連接到pET-5a上,并轉(zhuǎn)化BL21(DE3)pLysS.培養(yǎng)轉(zhuǎn)化了pET-5a:Tth的BL21(DE3)pLysS,加入IPTG誘導(dǎo),收集細(xì)胞并用溶酶破碎,用粗提液進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)表達(dá)蛋白的分子量大小,并以它作為酶源進(jìn)行PCR,測(cè)定該

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