烏賊墨多糖緩解環(huán)磷酰胺介導(dǎo)小鼠卵巢早衰的免疫學(xué)機制.pdf

1、目的:環(huán)磷酰胺是目前臨床上常用的氮芥類化療藥物，在殺傷腫瘤細胞的同時對機體正常組織也有較強的毒副作用，而使其在臨床上的應(yīng)用受到一定程度的限制。卵巢早衰是一種多病所致卵巢功能衰竭的綜合征，而機體自身免疫異常是導(dǎo)致卵巢早衰的一個重要因素。烏賊墨多糖是從烏賊墨中分離提取得到的活性物質(zhì)，關(guān)于烏賊墨多糖的成分、活性及其結(jié)構(gòu)研究前人已有較多報道，但是關(guān)于烏賊墨多糖緩解化療所致卵巢早衰的免疫學(xué)作用及其機制研究鮮見報道。因此，本研究擬通過小鼠腹腔注射環(huán)

2、磷酰胺造化療致卵巢早衰模型，口服灌喂烏賊墨多糖，比較觀察動物在化療后同一時期上相關(guān)臟器組織生理指標(biāo)、血液指標(biāo)及病理組織學(xué)的變化情況，從而探討烏賊墨多糖對環(huán)磷酰胺所致卵巢早衰所引起的卵巢、脾臟、胸腺和機體免疫損傷的緩解作用及其可能的免疫學(xué)機制，為其今后開發(fā)與臨床應(yīng)用提供科學(xué)理論依據(jù)。
　　方法:60只清潔級雌性昆明小鼠，按體重隨機分為6組:正常組、模型組、治療1組、治療2組、治療3組和治療4組。試驗期15天后，通過檢測體重變化、卵巢

3、指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、卵巢抗氧化能力MDA和T-SOD各指標(biāo)的變化，以期探索并確定烏賊墨多糖的最佳劑量。
　　40只清潔級雌性KM小鼠，按體重隨機分為4組:正常組、模型組、多糖組和治療組。試驗期15天后，檢測卵巢指數(shù)和血清性激素水平變化、卵巢組織病理學(xué)切片觀察。
　　40只清潔級雌性KM小鼠，按體重隨機分為4組:正常組、模型組、多糖組和治療組。試驗期15天后，檢測卵巢指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、血清中免疫水平和卵巢免疫因子

4、含量的變化。
　　40只清潔級雌性KM小鼠，按體重隨機分為4組:正常組、模型組、多糖組和治療組。試驗期15天后，檢測卵巢組織中Nrf2/ARE信號通路相關(guān)蛋白和酶表達量的變化，探究烏賊墨多糖激活環(huán)磷酰胺介導(dǎo)卵巢早衰小鼠Nrf2/ARE抗氧化信號通路及其作用機理。
　　結(jié)果:烏賊墨多糖能緩解或抑制化療所致卵巢氧化損傷，抑制環(huán)磷酰胺致卵巢指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的降低，明顯提高卵巢SOD活性、降低MDA含量，以降低卵巢脂質(zhì)化程度

5、，維持小鼠正常生長性能，表現(xiàn)出強抗氧化力。最終得出每只以80mg/kg烏賊墨多糖為緩解環(huán)磷酰胺（120 mg/kg CP）致卵巢早衰作用效果的最佳劑量。
　　腹腔注射環(huán)磷酰胺后小鼠卵巢指數(shù)明顯下降(P＜0.05)，血清FSH、LH水平極顯著升高(P＜0.01)，E2水平極顯著降低(P＜0.01)，卵巢各級卵泡數(shù)減少（P＜0.01），卵巢儲備能力降低，且卵巢組織出現(xiàn)間質(zhì)化;與模型組相比，治療組中SIP能不同程度改變環(huán)磷酰胺致卵巢早衰

6、小鼠上述各項指標(biāo)的變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　環(huán)磷酰胺能夠使卵巢早衰小鼠卵巢指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，血清CD4+T％、CD4+/CD8+比值、IL-2和TNF-α水平明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)及CD8+T％、NK％含量明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)，卵巢組織中IL-2和TNF-α水平均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01);與模型組相比，治療組小鼠的上述各項

7、指標(biāo)變化得到不同程度的改變(P＜0.05或P＜0.01)，烏賊墨多糖對環(huán)磷酰胺致卵巢小鼠具有免疫保護作用。
　　環(huán)磷酰胺能夠使卵巢早衰小鼠卵巢Nrf2/ARE信號通路的相關(guān)蛋白Nrf2、HO-1、NQO1、HDAC2的表達量明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，而PKC和Keap1表達量明顯升高(P＜0.05，P＜0.01);與模型組相比，治療組烏賊墨多糖能夠明顯(P＜0.05或P＜0.01)提高Nrf2、HO-1、NQO1、H