新加葛根芩連湯對糖尿病認(rèn)知障礙大鼠海馬微血管損傷及PI3K-AKT-CREB信號通路的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1.觀察新加葛根芩連湯防治糖尿病認(rèn)知功能障礙的效果。
　　2.分析糖尿病認(rèn)知功能障礙大鼠海馬神經(jīng)血管單元中腦微血管緊密連接蛋白、內(nèi)皮祖細(xì)胞、海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)及PI3K/AKT/CREB信號通路的變化，探索新加葛根芩連湯保護(hù)神經(jīng)血管單元的機(jī)制。
　　3.明確新加葛根芩連湯防治糖尿病認(rèn)知功能障礙的作用點(diǎn)。
　　方法：
　　選SD大鼠120只，適應(yīng)性飼養(yǎng)后分為空白組（15只）和高脂組（105只）?？瞻?/p>

2、組給予普通飼料喂養(yǎng)，高脂組給予高脂飼料喂養(yǎng)4周；繼之高脂組給予1％STZ腹腔注射復(fù)制糖尿病模型，空白組給予等量的0.1M的枸櫞酸鈉，3天后測隨機(jī)血糖＞16.7mmol/L視為糖尿病造模成功。將成功造模的大鼠隨機(jī)分為模型組，新加葛根芩連湯大、中、小劑量組，西藥對照組?？瞻捉M和模型組給予純凈水灌胃，治療組分別給予不同劑量的新加葛根芩連湯、西洛他唑灌胃。連續(xù)8周后Morris水迷宮測大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。測體重、血糖、血清胰島素水平，流式細(xì)胞儀檢

3、測外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量。HE、電鏡觀測海馬神經(jīng)元、微血管形態(tài)學(xué)改變及伊文藍(lán)注射后血腦屏障破壞情況，通過熒光分光光度定量的方法測腦組織伊文藍(lán)含量。RT-PCR檢測PI3K、AKT、CREB、HIF-1α、VEGF，免疫組化檢測CD34、IGF-1、CREB，Westen-blot檢測occludin、claudins、JAM-1、Z0-1四種緊密連接蛋白。
　　結(jié)果：
　　1.糖尿病8周時Morris水迷宮檢測學(xué)習(xí)記憶能力

4、明顯下降，說明糖尿病認(rèn)知功能障礙模型復(fù)制成功。
　　2.糖尿病大鼠伊文藍(lán)注射后觀測血管外滲明顯，光鏡下可見血管周圍藍(lán)染，伊文藍(lán)含量明顯高于空白組（P<0.05）。電鏡下血管外間隙水腫明顯，血管變形，官腔狹窄。免疫組化CD34染色陽性細(xì)胞較空白組較少。說明糖尿病大鼠微血管損害，血腦屏障破壞，微血管數(shù)目減少，微血管修復(fù)新生功能低下。
　　3.光鏡下可見模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)目減少、排列不規(guī)則、可見壞死細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞。說明糖尿

5、病大鼠出現(xiàn)海馬神經(jīng)元損傷。免疫組化顯示IGF-1、CREB表達(dá)減少。
　　4.新加葛根芩連湯干預(yù)后各治療組海馬光電鏡觀測細(xì)胞、血管形態(tài)均較模型組明顯改善，伊文藍(lán)含量較模型組明顯減低，occludin、claudins、Z0-1表達(dá)明顯增加。EPCs數(shù)量較模型組明顯增多，CD34陽性細(xì)胞增多,PI3KmRNA、AKTmRNA、CREBmRNA、HIF-1α mRNA、VEGFmRNA表達(dá)增強(qiáng)。
　　結(jié)論：
　　1.新加葛