CYP78A10基因轉化大豆的初步研究.pdf

1、大豆[Glycinemax(L.) Merr]是世界上重要的經(jīng)濟作物，為人類提供了多種豐富的植物蛋白油脂，同時大豆也是多種功能性醫(yī)療保健用品的重要來源，其籽粒中蛋白質(zhì)含量達40％，油分含量達20％。大豆在人類膳食方面提供了豐富多樣的資源，然而隨著貿(mào)易的逐漸發(fā)展以及人民生活水平的不斷提高，人們對大豆品質(zhì)的要求也逐步提高。因此對大豆品質(zhì)進行改良，使其具有更高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟效益，就成為了大豆育種工作者所要研究的目標。本研究主要取得以下研究進

2、展:
　　1、將屬于細胞色素P450超家族的，來源于擬南芥，參與短鏈脂肪酸羥基化反應的CYP78A10基因，作為目的基因，成功構建載體，并將目標載體成功轉化農(nóng)桿菌EHA105。
　　2、農(nóng)桿菌介導法遺傳轉化實驗中:在大豆種子萌發(fā)階段，不同的大豆品種，大豆萌發(fā)率不同，南農(nóng)88-1的萌發(fā)率高于大豆品種JACK;同一個品種JACK，在不同地方繁種，其萌發(fā)率差異較大，說明不同的生長環(huán)境影響大豆的萌發(fā)率;在共培養(yǎng)階段，用不同的時間處理

3、，用4天和5天處理，其在恢復培養(yǎng)階段出芽率基本沒有差異，為實驗提供了靈活性，超過5天處理，其在共培養(yǎng)階段就出芽，不利于除菌，因此共培養(yǎng)階段適宜用時4至5天;通過移栽初步得到27株抗性苗，通過實驗掌握了重要的實驗操作技術:農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備，質(zhì)粒轉化大腸桿菌，質(zhì)粒轉化農(nóng)桿菌等。
　　3、Dof轉錄因子參與植物多種生化反應，GmDof11基因就是Dof轉錄因子的一種，提取轉GmDof11大豆植株T1代株系V3期的大豆葉片DNA，PCR

4、擴增檢測確定陽性植株，進一步提取陽性植株RNA進行熒光定量檢測，發(fā)現(xiàn)同一株系的兩個單株的基因表達量相對穩(wěn)定，而不同株系之間基因表達量不同。通過實驗掌握了DNA提取技術，RNA提取技術，RT-PCR技術和熒光定量PCR技術。
　　4、轉GmDof11大豆T1代農(nóng)藝性狀分析結果: GmDof11基因的過表達，能夠明顯增加大豆植株的分枝數(shù)，說明GmDof11基因和分枝數(shù)性狀密切相關;株高性狀上，GmdDof11基因大豆T1代沒有表現(xiàn)出明