2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  PERK通過(guò)活化下游 eIF2α和Nrf-2兩條信號(hào)通路發(fā)揮促凋亡或抗凋亡效應(yīng),PERK內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路活化通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡參與多種疾病的發(fā)病。新近研究表明糖尿病腎病存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及PERK/eIF2α通路活化,然而,PERK/eIF2α通路活化與腎組織細(xì)胞凋亡間的關(guān)系尚不明確。本研究在證明糖尿病腎組織存在GRP78/PERK/eIF2α內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路活化,以及組織細(xì)胞凋亡增加的前期工作基礎(chǔ)上,擬采用RNA干擾技術(shù)下

2、調(diào)eIF2α和Nrf-2基因表達(dá),通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)旨在明確:⑴糖尿病腎組織細(xì)胞凋亡與PERK/eIF2α和(或)PERK/Nrf-2信號(hào)通路活化的關(guān)系;⑵高糖和血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡,是否依賴PERK/eIF2α和(或)PERK/Nrf-2信號(hào)通路活化;⑶ eIF2α和Nrf-2何為誘導(dǎo)凋亡的關(guān)鍵分子。本項(xiàng)目的意義在于為糖尿病腎病治療篩選新的有效的分子干預(yù)靶點(diǎn)。
  方法:
  體外培養(yǎng)腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E

3、),分別單獨(dú)轉(zhuǎn)染 eIF2α-siRNA、Nrf-2-siRNA慢病毒載體,用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,確定MOI值。轉(zhuǎn)染后的NRK-52E細(xì)胞加入高糖(30mmol/L)和不同濃度血管緊張素Ⅱ(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)刺激,觀察時(shí)間點(diǎn)為12h、24h、48h,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,篩選出血管緊張素Ⅱ的最佳作用濃度和最佳作用時(shí)間。實(shí)驗(yàn)分為四組:正常對(duì)照組(血糖5.5mmol/L)、高糖和血管緊張素Ⅱ

4、刺激組、高糖和血管緊張素Ⅱ+空載體組、高糖和血管緊張素Ⅱ+SiRNA組。通過(guò)免疫組化和Western blot方法檢測(cè)腎小管細(xì)胞eIF2α、p-eIF2α,Nrf-2表達(dá)水平,采用TUNEL方法檢測(cè)腎小管細(xì)胞凋亡。
  結(jié)果:
  1.熒光顯微鏡下可見(jiàn)大量綠色熒光表達(dá),轉(zhuǎn)染效率至少在80%以上,MOI值為10。
  2.流式細(xì)胞術(shù)篩選出血管緊張素Ⅱ的最佳作用濃度為10-7mol/L,最佳作用時(shí)間為24小時(shí)。
  

5、3.免疫組化和Western blot已經(jīng)證實(shí),正常情況下NRK-52E細(xì)胞中存在eIF2α和Nrf-2的表達(dá)。在加入高糖、血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后,p-eIF2α的表達(dá)明顯增加(p<0.05),在 eIF2α-SiRNA干擾后,eIF2α、p-eIF2α的表達(dá)明顯受抑制(p<0.05)。在Nrf-2-SiRNA干擾后,Nrf-2的表達(dá)明顯受抑制(p<0.05)。
  4.TUNEL結(jié)果中加入高糖、血管緊張素Ⅱ后 NRK52E細(xì)

6、胞凋亡增加,在eIF2α-SiRNA干擾后,細(xì)胞凋亡較正常對(duì)照組和高糖、AngⅡ組明顯減少(p<0.05);在Nrf-2-SiRNA干擾后,細(xì)胞凋亡較正常對(duì)照組和高糖、AngⅡ組明顯增加(p<0.05)。
  結(jié)論:
  1.正常情況下,NRK52E細(xì)胞中存在 eIF2α和Nrf-2的表達(dá),PERK/eIF2α信號(hào)通路在ERS反應(yīng)中發(fā)揮促凋亡作用,PERK/Nrf-2信號(hào)通路在ERS反應(yīng)中發(fā)揮抗凋亡作用。
  2.高糖

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