JBP485抗小鼠小腸損傷的機(jī)制及其與寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)體PERT1表達(dá)和功能變化的關(guān)系.pdf

1、目的：非甾體類抗炎藥(non-steroidal antiinflammatory drugs，NSAIDs)如吲哚美辛、阿司匹林等，臨床使用常引起胃腸道損害等副作用。PEPT1是位于小腸刷狀緣膜的寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)體，介導(dǎo)蛋白消化產(chǎn)物及類肽藥物的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)。營養(yǎng)不良及代謝失調(diào)均可引起PEPT1基因和蛋白表達(dá)發(fā)生變化，一些臨床常見病如潰瘍性結(jié)腸炎等也可誘導(dǎo)腸道PEPT1的表達(dá)和功能發(fā)生改變。JBP485(cyclo-trans-4-L-hydro

2、xyprolyl-L-serine;環(huán)狀-反式-4-左旋-羥脯氨酸-左旋絲氨酸)是一種二肽(dipeptide)，從日本抗肝炎藥物L(fēng)aennec(人胎盤水解物)中分離，具有一定的抗炎活性。本課題旨在研究JBP485對吲哚美辛誘導(dǎo)的腸損傷是否有保護(hù)作用以及是否會(huì)影響PEPT1表達(dá)和功能發(fā)生相應(yīng)變化。
　　 方法：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：按不同給藥方式將大鼠分為正常對照組、模型組、JBP485治療組和JBP485對照組。吲哚美辛給藥24小時(shí)后，分

3、別記錄各組大鼠腹瀉情況；將大鼠用乙醚麻醉后取空腸腸段觀察潰瘍情況；通過病理切片觀察腸黏膜的組織形態(tài)學(xué)變化；分別測定腸黏膜中的髓過氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量；各組大鼠在吲哚美辛灌胃給藥24小時(shí)后，分別進(jìn)行體內(nèi)口服吸收、離體翻轉(zhuǎn)腸和原位單向空腸灌流實(shí)驗(yàn)；分別提取各組大鼠腸黏膜的總RNA和蛋白，進(jìn)行RT-PCR和Westernblot實(shí)驗(yàn)測定各組大鼠PEPT1的mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　 細(xì)胞實(shí)驗(yàn):將于24孔板培

4、養(yǎng)14天的Caco-2細(xì)胞按不同給藥方式同樣分為正常對照組、模型組、JBP485治療組和JBP485對照組。分別測定細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)釋放率和丙二醛(MDA)含量，并且觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變。采用RT-PCR及Western blot實(shí)驗(yàn)測定各組細(xì)胞中PEPT1的mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：1．與正常對照組相比，模型組：(1)大鼠腹瀉及潰瘍情況顯著增多。光鏡下組織形態(tài)學(xué)和病理學(xué)觀察可見大鼠小腸組織出現(xiàn)潰瘍，潰瘍中央

5、腸黏膜壞死脫落，絨毛結(jié)構(gòu)消失，黏膜下層充血、出血，淋巴細(xì)胞浸潤。肌層充血，未見壞死。形成單層結(jié)構(gòu)的Caco-2細(xì)胞出現(xiàn)空洞，與細(xì)胞培養(yǎng)孔廣泛的分離，游離細(xì)胞增多。(2)大鼠小腸MPO、MDA水平顯著升高(p＜0.01)，Caco-2細(xì)胞的LDH釋放率及MDA含量顯著增加(p＜0.05，p＜0.01)，表明吲哚美辛能夠?qū)е滦∧c發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷，同時(shí)伴隨炎性細(xì)胞浸潤。(3)大鼠體內(nèi)口服、離體翻轉(zhuǎn)腸、在體腸灌流實(shí)驗(yàn)表明大鼠小腸對Gly-Sa

6、r的攝取能力均顯著下降，AUC顯著降低(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.05)，結(jié)果提示吲哚美辛誘導(dǎo)大鼠腸損傷后小腸黏膜上的PEPT1攝取功能下降。(4)RT-PCR與Western blot結(jié)果一致，大鼠小腸PEPT1和Caco-2細(xì)胞中PEPT1表達(dá)均下降。結(jié)果表明，吲哚美辛誘發(fā)小腸損傷后腸黏膜上的PEPT1表達(dá)下降。
　　 2．與模型組相比，JBP485治療組：(1)大鼠腹瀉及發(fā)生潰瘍例數(shù)顯著減少。光鏡下組織形態(tài)學(xué)和病

7、理學(xué)觀察可見大鼠小腸組織病理改變明顯減輕，絨毛結(jié)構(gòu)缺失顯著減少，黏膜下層充血得到緩解，淋巴細(xì)胞浸潤不明顯。Caco-2細(xì)胞破損顯著改善，細(xì)胞單層結(jié)構(gòu)較完整。(2)JBP485能夠抑制小腸發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷，減少炎性細(xì)胞浸潤，表現(xiàn)為大鼠小腸MPO、MDA水平顯著降低(p＜0.05)，Caco-2細(xì)胞的LDH及MDA水平顯著下降(p＜0.05)。(3)JBP485給藥后增強(qiáng)了吲哚美辛誘導(dǎo)大鼠腸損傷黏膜上PEPT1的攝取功能，表現(xiàn)為在大鼠體內(nèi)

8、口服、離體翻轉(zhuǎn)腸、在體腸灌流實(shí)驗(yàn)中大鼠小腸對Gly-Sar的攝取能力均增強(qiáng)，AUC顯著增大(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.05)。(4)RT-PCR與Western blot結(jié)果趨勢相同，JBP485抑制了吲哚美辛誘導(dǎo)腸損傷黏膜上PEPT1的表達(dá)下降，使大鼠小腸PEPT1和Caco-2細(xì)胞中PEPT1表達(dá)顯著上調(diào)。
　　 3．與正常對照組相比，JBP485對照組各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無顯著性差異，病理學(xué)及形態(tài)學(xué)無明顯改變。