缺氧對二價金屬轉(zhuǎn)運體（DMT1）表達的影響.pdf

1、目的：研究不同的缺氧方法對培養(yǎng)細胞二價金屬轉(zhuǎn)運體(Divalentmetaltransporter1，DMTl)表達的影響，初步探討低氧誘導因子1(Hypoxiainduciblefactor-1,HIF.1)與DMTl兩種異構體(+IREDMTl和-IREDMTl)之間的關系。 方法：用COCl2誘導PCI2細胞及HepG2細胞缺氧，檢測DMTl的表達，確定對COCl2缺氧敏感的細胞株。在此基礎上用WesternBlot法檢測

2、低氧(1％02)及呼吸鏈抑制劑疊氮鈉(NaN3)和魚藤酮(Rotenone)對該細胞株HIF.1Q及DMTl表達的影響，用免疫細胞化學法檢測低氧(1％02)對HIF.1α及DMTl在該細胞內(nèi)分布的影響。 結果： 1.用不同濃度的CoCl2(0.025mM、0.05mM、0.125mM、0.25mM、0.5mM、1mM)處理PCI2細胞4小時后，其+IREDMTl的表達量與未用COCl2處理時相比，均無明顯改變。

3、2.HepG2細胞在經(jīng)過不同濃度的COCl2處理4小時后，隨著COCl2濃度的增加，HIF.1Q及DMTl的兩種異構體的表達均逐漸增加。當COCl2濃度為lmm時HIF.1Q表達量最大，在COCl2濃度為0.5mM時+IREDMTl和.IREDMTl的表達量達到最高值。 3.HepG2細胞HIF.1Q在低氧(1％02)處理1小時開始即有表達，3小時至6小時其表達量達到高峰。+IREDMTl在低氧處理1小時也有增加，6小時達到最高

4、峰。.IREDMTl在低氧3小時開始表達有明顯增加，6小時達到最高并持續(xù)至12小時處。 4.HepG2細胞HIF.1Q在低氧6小時有明顯表達，復氧24小時后，HIF.1Q被降解。復氧24小時后，+IREDMTl的表達也明顯少于單純低氧6小時的表達量，而-IREDMTl的表達量卻無明顯改變。 5.HepG2細胞用NaN3處理1小時后，DMTl的兩種異構體在NaN3濃度為10mM及20mM時，其表達量均比對照組明顯增加；用r

5、otenone處理24小時后，+IREDMTl在rotenone濃度為20ltm時，其表達量與對照組相比有明顯的增加，.IREDMTl在rotenone濃度為1μM及20μM時，其表達量與對照組相比均無明顯改變；NaN3和rotenone都不能使HepG2細胞HIF.1Q明顯表達。 6.在常氧環(huán)境中，DMTl兩種異構體在HepG2細胞胞漿及胞核中均勻分布，HIF.1Q無明顯表達。低氧(1％02)可使+IREDMTl聚集于胞漿及核

6、膜上，而原本位于胞漿中的-IREDMTl更趨向于胞膜，胞核中的-IREDMTl也有向核膜集中的趨勢，但不如+IREDMTl明顯，HIF.1Q則在細胞核中大量表達。 結論： 1.COCl2和低氧(1％02)可使HepG2細胞的HIF.1Q蓄積和DMTl兩種異構體的表達增加，并且三者的變化趨勢基本一致，提示DMTl的表達可能受到HIF.1的調(diào)控，DMTl可能是HIF.1的下游基因。 2.NaN3和rotenone雖不