單克隆抗體介導的禽腦脊髓炎病毒檢測方法的建立及其結(jié)構(gòu)蛋白VP3的初步研究.pdf

1、揚州大學碩士學位論文單克隆抗體介導的禽腦脊髓炎病毒檢測方法的建立及其結(jié)構(gòu)蛋白VP3的初步研究姓名：唐波申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：徐建生20050501唐波禽腦脊髓炎病毒檢鋇4方法的建立及其結(jié)構(gòu)蛋白VP3的初步研究單克隆抗體介導的禽腦脊髓炎病毒檢測方法的建立及其結(jié)構(gòu)蛋白VP3的初步研究學科專業(yè)：預防獸醫(yī)學研究生：唐波導師：徐建生副教授中文摘要禽腦脊髓炎(Avianencephalomyelitis，AE)是由禽腦脊髓炎病

2、毒(AEV)引起的以侵害幼禽中樞神經(jīng)系統(tǒng)為主要特征的傳染病，雞、火雞、野雞、鵪鶉均可感染本病，其臨床疾病特征為病禽共濟失調(diào)、震顫和非化膿性腦脊髓炎。該病現(xiàn)已遍及世界大多數(shù)國家。我國1980年以來，先后在廣東、江蘇、遼寧、黑龍江、河北、內(nèi)蒙古、福建、上海等省市區(qū)發(fā)生。禽腦脊髓炎病毒可以經(jīng)糞口水平傳播，也可以通過雞胚垂直傳播，因此用感染了禽腦脊髓炎病毒的雞群所產(chǎn)的雞胚生產(chǎn)疫苗，就有可能使疫苗污染該病毒。有兩種經(jīng)典的方法被推薦用來檢測疫苗中的

3、AEV，這兩種方法涉及到將疫苗接種6日齡易感雞胚或1日齡雛雞，然后觀察其癥狀和病變，因此都比較繁瑣、耗時且耗財。目前多采用免疫學方法，如免疫熒光(FA)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)來直接檢測抗原。這些方法中，為了避免非特異性反應，使用了提純或吸收的抗血清。單克隆抗體特異性強，被認為是鑒定病毒因子的可靠方法，已用于多種病毒感染的診斷。國外已有用AEV單克隆抗體(VR91株)建立免疫組化、間接免疫熒光和免疫過氧化物酶染色、抗生物素蛋白生物

4、素一過氧化物酶染色方法檢測AEV抗原的成功報道，并用于AEV的定量研究，而國內(nèi)相關(guān)報道較少，成功應用的更少。為了建立特異性檢測禽腦脊髓炎病毒的方法，本研究利用雞胚擴增了禽腦脊髓炎病毒，并通過氯化銫密度梯度離心進行提純，用純化的病毒制備了抗禽腦脊髓炎病毒單克隆抗體，建立了單克隆抗體介導的間接ELISA法、DotELlSA法、間接免疫熒光法以及免疫組織化學法等檢測禽腦脊髓炎病毒的方法。小RNA病毒科中，結(jié)構(gòu)蛋白VP3被認為與病毒的持續(xù)感染、