小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中前列腺毒通路的調(diào)控.pdf

1、胚胎著床是哺乳動(dòng)物生殖過(guò)程中至關(guān)重要的一步,子宮與胚胎之間的相互作用必須發(fā)生在一定的時(shí)間內(nèi),才能保證妊娠的順利進(jìn)行。在臨床上,胚胎在正常的著床窗口外著床會(huì)導(dǎo)致妊娠損失的風(fēng)險(xiǎn)增加。前列腺素在雌性生殖過(guò)程中具有很重要的作用,包括排卵、受精、胚胎著床、蛻膜化和胎盤形成等。Cox-2、cPLA2α和Lpar3敲除鼠中胚胎著床延遲,著床前注射前列腺素可以使胚胎著床時(shí)間恢復(fù)正常,但并不能挽救cPLA2α和Lpar3敲除鼠中胚胎不均勻分布現(xiàn)象。盡管C

2、ox-2和cPLA2α在生殖過(guò)程中發(fā)揮重要作用,但它們?cè)谧訉m中的表達(dá)調(diào)節(jié)仍知之甚少。在胚胎著床點(diǎn)的基質(zhì)細(xì)胞中COX-2、cPLA2α、EP1、EP4、PPARδ、C/EBPβ、STAT3及β-catenin等基因表達(dá)的部位非常相似,近些年研究表明PPARδ、C/EBPβ、STAT3、β-catenin與前列腺素相關(guān)基因間存在調(diào)控關(guān)系。本研究擬利用WesternBlot、Real-timePCR和熒光素酶分析等方法,對(duì)前列腺素相關(guān)基因在子

3、宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中的調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行探討。
　　 利用WesternBlot發(fā)現(xiàn)小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中,PGE2處理15分鐘后cPLA2β的505位絲氨酸磷酸化上調(diào),這種上調(diào)具有濃度依賴性。PGE2處理24小時(shí)后,cPLA2α仍處于很高磷酸化狀態(tài),同時(shí)cPLA2α的mRNA和蛋白也有明顯的上調(diào)。PGE2可以活化子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中的p38、ERK1/2和JNK,PGE2對(duì)cPLA2a的磷酸化可以被MEK抑制劑U0126抑制,部分受p38

4、抑制劑SB203580抑制。PGE2誘導(dǎo)的cPLA2α、p38和ERK1/2磷酸化可以被EP1拮抗劑所抑制,表明PGE2主要通過(guò)EP1/ERK調(diào)節(jié)cPLA2α的活化。小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中PGE2還可以顯著上調(diào)STAT3Tyr705的磷酸化和COX-2表達(dá)。在Cox-2啟動(dòng)子的-586～-579位置存在一個(gè)STAT3結(jié)合位點(diǎn)。把STAT3過(guò)表達(dá)載體與Cox-2啟動(dòng)子報(bào)告載體共表達(dá),可以明顯刺激啟動(dòng)子活性,把STAT3的Tyr705突變后

5、則不能上調(diào)Cox-2啟動(dòng)子的活性,表明STAT3Tyr705磷酸化對(duì)Cox-2的啟動(dòng)子活性很重要。PGE2對(duì)STAT3的磷酸化以及對(duì)COX-2的上調(diào)可以被EP1拮抗劑、MEK抑制劑和STAT3抑制劑所抑制,表明PGE2通過(guò)EP1/ERK/STAT3通路調(diào)節(jié)COX-2的表達(dá)。
　　 本研究發(fā)現(xiàn),花生四烯酸在小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中具有多種生物活性。它可以上調(diào)p38、ERK1/2和JNK的磷酸化,磷酸化水平在AA處理5分鐘時(shí)最高?；ㄉ?/p>

6、四烯酸對(duì)cPLA2α的磷酸化可以被MEK抑制劑U0126抑制,部分被p38抑制劑SB203580抑制,表明花生四烯酸主要通過(guò)ERK1/2調(diào)節(jié)cPLA2α的磷酸化。花生四烯酸處理1小時(shí)后可以明顯上調(diào)Cox-2mRNA的表達(dá),處理3小時(shí)后COX-2蛋白上調(diào)。花生四烯酸還可以誘導(dǎo)C/EBPβ的磷酸化和蛋白表達(dá)。經(jīng)預(yù)測(cè)在Cox-2啟動(dòng)子-1053～+77區(qū)域內(nèi),有四個(gè)C/EBPβ結(jié)合位點(diǎn)。通過(guò)熒光素酶分析發(fā)現(xiàn)其中有兩個(gè)位點(diǎn)對(duì)Cox-2啟動(dòng)子有調(diào)

7、節(jié),分別是-872～-864位點(diǎn)和-117～109位點(diǎn)?；ㄉ南┧釋?duì)COX-2的誘導(dǎo)可以被p38抑制劑、MEK抑制劑、C/EBPβ的siRNA和抑制型C/EBPβ(LIP)所抑制?；ㄉ南┧嵴T導(dǎo)的C/EBPβ蛋白表達(dá)可以被p38抑制劑抑制,而C/EBPβ的磷酸化可以被p38抑制劑和MEK抑制劑抑制?？傊?花生四烯酸通過(guò)C/EBPβ調(diào)節(jié)COX-2的表達(dá),而C/EBPβ的活化受p38和ERK1/2調(diào)控。二十碳四炔酸ETYA是花生四烯酸的類似

8、物,它可以作為假底物不被環(huán)氧合酶和脂氧化酶代謝,因此可以用來(lái)驗(yàn)證AA本身的功能。ETYA處理基質(zhì)細(xì)胞后,COX-2和C/EBPβ明顯上調(diào),cPLA2α、p38、ERK1/2、JNK和C/EBPβ的磷酸化也上調(diào),表明花生四烯酸可以不依賴前列腺素和白三烯的生物合成,獨(dú)立發(fā)揮作用。
　　 基于本研究的數(shù)據(jù),小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中AA和PGE2可以促進(jìn)cPLA2α/COX-2通路活化,形成了前列腺素的正調(diào)節(jié)通路。由于前列腺素的不穩(wěn)定性,