白僵菌對小菜蛾、棉鈴蟲的毒力比較及侵染機(jī)制差異性研究.pdf

1、球孢白僵菌(Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin)是目前國內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的昆蟲病原真菌之一，能侵染15個目149個科的700多種昆蟲，不同白僵菌菌株對不同昆蟲的致病力存在很大差異。本研究以在不同寄主中分離純化得到的白僵菌菌株HFW-05、TE-07、Lu-08、Dj-04為供試菌株，明確了四株供試菌株的種間分類和酯酶型、生物學(xué)特征；測定了四菌株對鱗翅目害蟲小菜蛾、棉鈴蟲的毒力；通過掃描電鏡觀察了不

2、同菌株分生孢子在同種昆蟲和相同菌株分生孢子在不同昆蟲的表皮侵染；在此基礎(chǔ)上，明確了三種酶對菌株在表皮侵染過程中的作用，并克隆了四株白僵菌的幾丁質(zhì)酶基因。
　　 通過對四株球孢白僵菌ITS 區(qū)序列和酯酶同工酶圖譜分析，結(jié)果表明四株白僵菌為球孢白僵菌種下的不同酯酶型。測定四菌株對小菜蛾和棉鈴蟲2 齡幼蟲的毒力，結(jié)果表明，HFW-05菌株對小菜蛾致病力較高，6 d后校正死亡率為87.14％，其余三株均不高于40％，四菌株對棉鈴蟲6 d

3、后校正死亡率均低于15％。
　　 掃描電鏡觀察顯示：分生孢子在小菜蛾、棉鈴蟲體表的附著部位相似，多附著在凹陷部位、剛毛窩處、褶皺處、體壁嵴狀突起之間，體壁的光滑部位分布較少。四菌株分生孢子在小菜蛾表皮附著12h后均可萌發(fā)，高致病力HFW-05菌株孢子萌發(fā)后直接穿透寄主表皮或產(chǎn)生較短穿透芽管，萌芽管貼于表皮生長，有些萌芽管末端彎曲指向表皮，在附著后16 h，萌芽管發(fā)生定向生長、垂直向里穿透表皮；其余三株低毒力菌株分生孢子的萌發(fā)、萌

4、芽管的生長行為相似，只是萌芽管在穿透表皮之前伸的較長。供試菌株孢子在棉鈴蟲表皮均能萌發(fā)，但萌芽管呈蔓延生長無法穿透寄主表皮，感染36 h后的試蟲表皮可觀察到芽生孢子。結(jié)果表明菌株毒力大小與分生孢子在寄主體表的附著能力無直接相關(guān)性，但與萌芽管能否穿透表皮以及穿透時的伸長長度密切相關(guān)。
　　 用脂肪酶、蛋白酶K、幾丁質(zhì)酶三種單一酶液和脂肪酶+蛋白酶、脂肪酶+幾丁質(zhì)酶、蛋白酶+幾丁質(zhì)酶、脂肪酶+蛋白酶+幾丁質(zhì)酶四種復(fù)合酶液分別處理2

5、齡小菜蛾、棉鈴蟲后，測定低毒力菌株對目標(biāo)昆蟲的毒力變化。結(jié)果顯示，菌株對酶液處理后的試蟲毒力均有一定程度的提高，其中對幾丁質(zhì)酶和含幾丁質(zhì)酶的復(fù)合酶液處理后的小菜蛾和棉鈴蟲毒力提高最明顯。對小菜蛾6 d 相對死亡率在單一酶液處理之間差異呈極顯著（F=15.955，P<0.01），其中幾丁質(zhì)酶處理后Lu-08菌株的死亡率是對照組的2.9倍，毒力提高最明顯，脂肪酶處理后Dj-04菌株毒力為對照組的1.15倍；棉鈴蟲經(jīng)三種單一酶液處理后，6 d

6、后相對死亡率在酶處理之間差異性顯著（F=17.695，P<0.05），菌株對幾丁質(zhì)酶處理后的棉鈴蟲毒力提高最明顯，菌株HFW-05、TE-07、Lu-08、Dj-04的死亡率分別為對照組的4.52、5.55、37.33、17.12倍。這在一定程度上反映出供試菌株分生孢子在穿透小菜蛾和棉鈴蟲體壁過程中，幾丁質(zhì)酶與供試菌株毒力相關(guān)性更顯著。
　　 克隆四菌株幾丁質(zhì)酶基因并測序，幾丁質(zhì)酶基因的序列完全相同，編碼區(qū)包括1047bp，編碼