棉鈴蟲功能基因重組病毒殺蟲劑研究及棉鈴蟲細胞系的建立.pdf

1、本文在實驗室前期工作基礎上，進行了兩種棉鈴蟲功能基因重組病毒殺蟲劑的實驗研究，為篩選新的重組病毒候選基因提供實驗證據。論文還探索建立了三種體外連續(xù)傳代的棉鈴蟲細胞系，為進一步在體外研究棉鈴蟲活體細胞的激素調控、病毒感染、細胞凋亡等分子生物學機制奠定了基礎?，F將論文內容概括如下： 第一部分：棉鈴蟲功能基因重組病毒殺蟲劑研究。桿狀病毒中絕大部分是昆蟲特異性病原，因不感染脊椎動物，是理想的控制害蟲的生物“工具”。然而根據研究得知，野生

2、型桿狀病毒具有殺蟲譜窄，殺蟲速度慢的缺點。遺傳改造病毒，選用外源基因構建重組病毒，使重組病毒感染蟲體后除了病毒的毒殺作用外還通過外源基因的持續(xù)表達雙重干擾昆蟲，以加快害蟲的死亡、提高害蟲的死亡率，大大減少農林業(yè)的經濟損失。已報道了多種基因重組病毒，如蝎毒素、螨毒素、利尿激素、保幼激素酯酶等基因的重組病毒，其殺蟲效果雖都優(yōu)于相應的野生型病毒，但仍不理想。新的安全高效的基因重組病毒候選基因需要探索和發(fā)現。 第二部分：棉鈴蟲表皮、精巢

3、、卵巢細胞系的建立。探索建立了棉鈴蟲表皮、精巢、卵巢三種組織的新細胞系，依次命名為SDU-Ha-Epi，SDU-Ha-Spe，SDU-Ha-Ova。已分批在-196℃冷凍保存。對表皮和精巢細胞系分別進行了細胞生長曲線、群體細胞倍增時間、染色體，酯酶同工酶以及病毒敏感性檢測等。表皮和精巢細胞系各有多種細胞類型，表皮細胞指數生長期在第4～11d，精巢細胞系在第3～9d，表皮細胞系的群體倍增時間為64h，精巢細胞系為42h；兩種細胞系的染色體

4、都具有典型的鱗翅目特點，表皮細胞系的酯酶的帶型與來自棉鈴蟲5齡蛻皮期的表皮帶型相似性高；表皮細胞系對野生型病毒HaSNPV幾乎無異常反應，對AcMNPV的反應主要是發(fā)生典型、高比率的凋亡，精巢細胞系對兩種病毒均敏感。 本文新建立的表皮細胞系是昆蟲界少見的體壁表皮組織細胞系，為昆蟲蛻皮相關基因的調控表達研究提供了體外活體實驗材料；由于表皮細胞系和精巢細胞系顯示了對同一病毒HaSNPV的截然不同的反應，為研究病毒感染細胞的機理提供了