鉤藤堿提取工藝和質(zhì)量標準建立、初步藥效學(xué)研究.pdf

1、鉤藤為我國傳統(tǒng)中藥，其藥材中所含吲哚類生物堿為主要藥效成分，現(xiàn)代藥理研究表明，鉤藤生物堿除具有降壓、抗癲癇作用外，還有一定抗焦慮作用，應(yīng)用價值較高。為了進一步研究鉤藤活性成分，特別是鉤藤生物堿的藥用價值，如何從鉤藤藥材中獲得鉤藤生物堿有效成分成為進一步研究的關(guān)鍵?，F(xiàn)有提取工藝主要針對鉤藤粗提物及總生物堿，針對有效成分的提取研究較少。本課題對鉤藤堿提取純化工藝、質(zhì)量標準及抗焦慮藥效學(xué)進行研究，確定最佳提取純化工藝，考察質(zhì)量標準，并對其抗焦

2、慮藥效進行初步評價。
　　 1.定性定量方法建立建立薄層色譜定性分析鉤藤堿的方法，以丙酮-石油醚-氨水(1:2:0.2)為展開劑，鉤藤堿在GF254 硅膠板(規(guī)格：厚度0.2～0.25mm，25×40mm)上能與其它生物堿及雜質(zhì)有效分離，在5分鐘內(nèi)即可完成鉤藤堿的鑒別。
　　 建立高效液相色譜外標法定量分析鉤藤堿的方法，采用Platisil ODS(150mm×4.6mm，5 μm)色譜柱，以乙腈:0.01mol/L 磷

3、酸二氫鉀(KOH 調(diào)pH8.0)為流動相，梯度洗脫，在40min內(nèi)乙腈與0.01mol/L 磷酸二氫鉀比例由30:70線性遞增至60:40，流速：
　　 1.0mL/min，柱溫：30℃，檢測波長：245 nm，進樣量：20μL。方法所獲線性回歸方程為y=3.64×104x－2.13×104，相關(guān)系數(shù)r=0.9995；重復(fù)性試驗粗提物樣品鉤藤堿含量測定RSD為6.50％，保留時間RSD為0.69％(n=9)；加樣回收試驗高、中、

4、低濃度回收率分別為95.95％、109.62％和114.40％。所建方法可將鉤藤堿與其它生物堿及雜質(zhì)有效分離，能滿足對鉤藤堿含量測定的要求。
　　 2.提取純化工藝研究第一步先通過單影響因素試驗對提取溶劑、藥材冷浸時間及超聲頻率進行考察篩選，再通過L9(3)3 正交試驗對乙醇百分比、藥材質(zhì)量與溶劑體積比(物料比)及超聲時間進一步考察，確定鉤藤藥材粗提物最佳提取工藝為以80％乙醇作為提取溶劑，藥材質(zhì)量與溶劑體積比(物料比)為1:5

5、，4℃冷浸12 h，超聲1h，超聲頻率為50Hz，藥材粗提物提取率達到7.54％；第二步選擇硅膠柱層析法作為從藥材粗提物中分離制備鉤藤堿的方法，以丙酮-石油醚-氨水(1:2:0.2)為洗脫溶劑，粗提物上樣量與硅膠質(zhì)量比為1:40，收集鉤藤堿餾分以2％鹽酸、氯仿萃取、水洗、凍干得到90％以上鉤藤堿，提取率可達0.201‰。
　　 3.質(zhì)量標準及初步穩(wěn)定性研究采用紫外光譜、質(zhì)譜及核磁共振對新工藝制備鉤藤堿樣品進行結(jié)構(gòu)鑒定，并與標準譜

6、圖比較，確定了鉤藤堿的結(jié)構(gòu)、分子量；進行砷鹽、重金屬及殘留溶劑檢查，結(jié)果符合2010版藥典標準；分別考察了高溫、高濕、強光照射等影響因素對鉤藤堿的影響，結(jié)果鉤藤堿在10天內(nèi)含量未發(fā)生明顯變化；對鉤藤堿在強酸、強堿條件下穩(wěn)定性進行考察，結(jié)果在2％、4％、8％ HCl中室溫放置24 h，在0.1mol/L NaOH中放置8小時鉤藤堿含量沒有明顯改變，說明鉤藤堿在上述介質(zhì)中較穩(wěn)定。
　　 4.初步抗焦慮藥效學(xué)研究進行大、小鼠高架十字迷