基于miRNA組學的生脈方及人參皂苷Rg3抗慢性心衰的作用機制研究.pdf

1、生脈方在臨床上多用于治療慢性心力衰竭、心律失常等心血管疾病。S型人參皂苷Rg3作為生脈方的活性化合物之一，其心肌保護機制尚有待深入研究。本論文應用miRNA組學技術研究生脈方及S型人參皂苷Rg3抗慢性心衰作用，在大鼠慢性心衰模型上發(fā)現(xiàn)生脈方和S型人參皂苷Rg3調控的差異miRNA，推測其作用靶點與潛在作用途徑，在細胞模型上驗證生脈方和S型人參皂苷Rg3的心肌保護作用，為闡釋生脈方及其藥效物質的作用機制提供依據(jù)。
　　主要研究成果如

2、下:
　　1、采用miRNA芯片技術研究生脈方對慢性心衰大鼠心肌miRNA表達的影響，發(fā)現(xiàn)與模型組相比有16個差異miRNA，其中10個表達上調，6個表達下調。差異miRNA中包括與心肌肥大相關的miR-21-3p，與缺氧損傷相關的miR-294，與凋亡相關的miR-542-3p，采用RT-PCR技術對這些miRNA進行進一步驗證。構建了差異miRNA的靶基因網絡圖，找出生脈方可能影響的信號通路與潛在的作用途徑，并在細胞水平上驗證

3、了生脈方具有抗心肌細胞肥大和抗心肌細胞凋亡的作用。
　　2、采用miRNA芯片技術研究生脈方中的活性物質S型人參皂苷Rg3對心衰大鼠缺血心肌miRNA表達的影響，發(fā)現(xiàn)與模型組相比有14個差異miRNA，其中8個表達上調，6個表達下調。發(fā)現(xiàn)差異miRNA中有參與SIRT1調控的miR-200-5p，預測相關的靶基因及可能影響的通路，并以SIRT1為靶點進行深入研究。應用SIRT1活性檢測熒光探針篩選生脈方中的活性化合物，發(fā)現(xiàn)12個具

4、有SIRT1激動活性的化合物，其中7個來自人參，2個來自麥冬，3個來自五味子。研究人參皂苷類SIRT1激動劑的結構規(guī)律，發(fā)現(xiàn)母核為原人參二醇的人參皂苷類化合物具有較強的SIRT1激動活性，特別是人參皂苷20號碳的S構型對激動SIRT1起關鍵作用。以S型人參皂苷Rg3為代表性化合物，運用分子對接技術發(fā)現(xiàn)S型人參皂苷Rg3在底物多肽與SIRT1結合過程中起橋梁作用，從而增強蛋白與底物的結合能力。應用液相質譜聯(lián)用、表面等離子共振等技術進一步驗