參芎葡萄糖注射液對急性心肌梗死的保護作用及與6種常用注射劑配伍風險評估研究.pdf

1、參芎葡萄糖注射液（Salivae Miltiorrhizae Liguspyragine Hydrochloride and Glucose Injection，SGI）主要成分為丹參素和鹽酸川芎嗪，臨床主要用于閉塞性腦血管疾病及其他缺血性疾病的治療。目前，關于SGI對急性心肌梗死的保護作用及與臨床常用注射劑配伍風險評估的研究鮮見報道。為獲取更加全面的藥品信息，本課題從有效性與安全性的角度，對其進行了三個部分的研究。
　　第一部分

2、，我們進行了SGI對異丙腎上腺素誘導的急性心肌梗死模型大鼠的保護作用研究。
　　目的：利用異丙腎上腺素建立大鼠急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）模型，通過對心臟梗死面積、心電圖、心功能指標、心肌酶學等的檢測及心臟組織形態(tài)學的觀察，評價SGI對急性心肌梗死大鼠的防治作用，并初步探討其可能的作用機制。
　　方法：雄性SD大鼠75只隨機分為對照組、模型組、血栓通注射液組（Panax No

3、toginseng Saponins,PNS）、SGI低、中、高劑量組，每天靜脈給藥1次，對照組和模型組大鼠靜脈注射等體積5％葡萄糖注射液，連續(xù)7天。各組均于造模前檢測心電圖（記做0min），并于給藥的第6、7天腹腔注射異丙腎上腺素3mg/kg，每日1次，連續(xù)2d，建立急性心肌梗死模型，并于第7天注射異丙腎上腺素后檢測心電圖、心率、心輸出量、射血分數(shù)、左軸縮短率、左室舒張末期直徑、左室收縮末期直徑、左室舒張末期容積及左室收縮末期容積等心

4、功能指標，用2,3,5-氯化三苯四唑（2,3,5-triphenylte-trazolium chloride,TTC）染色法測定心肌梗死面積，H&E染色觀察心肌細胞病理組織結構的變化，并測定血清肌酸激酶（creatine kinase,CK）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌鈣蛋白I（cardiac Troponin I,cTn-I）及腦鈉素（brain natriuretic peptide,BN

5、P）等含量。
　　結果：
　　1.模型組心電圖ST段較對照組明顯抬高；心臟梗死面積較對照組明顯增大（P<0.01）。心輸出量、射血分數(shù)、左軸縮短率、左室舒張末期直徑、左室收縮末期直徑、左室舒張末期容積及左室收縮末期容積等心功能指標較對照組有顯著性差異（P<0.01）。血清CK、LDH、cTn-I及BNP水平與對照組相比有顯著性差異（P<0.01）。以上實驗結果提示給大鼠連續(xù)2天皮下注射3mg/kg的異丙腎上腺素可以成功制備急

6、性心肌梗死大鼠模型。
　　2.SGI各劑量組心電圖ST段較模型組都有所下降，其中SGI高、中劑量組ST段下降至與PR段水平的位置，心電圖基本恢復正常水平。
　　3.SGI高、中、低劑量組及PNS組心肌梗死面積較模型組明顯縮?。≒<0.01或P<0.05）。
　　4.SGI高劑量組血清CK、LDH、cTn-I及BNP水平較模型組相比明顯下降（P<0.01），SGI中劑量組血清CK、cTn-I及BNP水平較模型組相比明顯下

7、降（P<0.05），SGI低劑量組血清CK水平較模型組相比明顯下降（P<0.05）。
　　5.心肌組織H&E染色情況顯示，對照組大鼠心肌纖維排列整齊，染色均勻、結構清晰，心肌無壞死病灶及炎性細胞浸潤等病理性改變。模型組大鼠心肌損傷明顯，心肌纖維排列疏松紊亂，心肌細胞呈顆粒性變及嗜酸性變，間質血管擴張充血，外膜下心肌間及心內膜出現(xiàn)大量炎性細胞浸潤。SGI高、中、低劑量組及PNS組大鼠心肌損傷較模型組改變輕微，心肌纖維排列整齊，部分排

8、列疏松，部分心肌細胞呈顆粒性變及嗜酸性變，間質少量血管擴張充血，外膜下心肌間及心內膜出現(xiàn)少量炎性細胞浸潤。
　　6.SGI高、中、低劑量組及PNS組心輸出量、射血分數(shù)、左軸縮短率、左室舒張末期直徑、左室收縮末期直徑、左室舒張末期容積及左室收縮末期容積等心功能指標較模型組有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。
　　第二部分、我們進行了SGI對阿霉素所致心肌細胞損傷保護作用研究。
　　目的：研究SGI對阿霉素(Dox

9、orubicin,DOX)所致心肌細胞損傷的保護作用，并探討其作用機制。
　　方法：體外培養(yǎng)H9c2細胞，采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法檢測細胞毒性，熒光探針法檢測細胞內鈣離子濃度。
　　結果:
　　1.DOX可導致細胞內鈣離子濃度升高，細胞活力下降。
　　2.抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）及SGI干預均可顯著減輕細胞

10、內鈣超載（P<0.01），并對細胞活力有一定的改善作用。
　　第三部分、我們進行了SGI與6種臨床常用注射劑配伍風險評估。
　　目的：評估SGI與6種臨床常用注射劑配伍風險。
　　方法：以SGI為模式藥，以6種藥物注射劑，即左氧氟沙星氯化鈉注射液（Levofloxacin and Sodium Chloride Injection,LSI）、注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉（Cefoperazone Sodium and Su

11、lbactam Sodium for Injection,CSI）、前列地爾注射劑（Alprostadil Injection,AI）、右旋糖酐40葡萄糖注射液（Dextran40 Glucose Injection,DI）、骨肽注射劑（Ossotide Injection,OI）、甘油果糖氯化鈉注射液（Glycerol Fructose and Sodium,GSI）為配伍注射劑，采用等溫滴定量熱法（isothermal titrat

12、ion calorimetry,ITC）分別考察藥物間相互作用，以熱力學參數(shù)吉布斯自由能變（ΔG）、焓變（ΔH）、熵變（ΔS）判斷溶合反應類型，同時通過對比不同注射劑混合前后化學HPLC圖譜、pH值、不溶性微粒數(shù)等特征信息對注射液配伍風險進行綜合評價。
　　結果：
　　1.ITC法檢測發(fā)現(xiàn)：在SGI和LSI、CSI、AI、OI、GSI的混合過程中ΔG＜0，表明上述混合過程發(fā)生自發(fā)反應。其中，CSI、AI和SGI的反應是焓驅反

13、應（│ΔH│ T│ΔS│），這意味著主要發(fā)生物理反應，即某些物理性質如溶解度可能發(fā)生改變。然而，在SGI和DI溶合的過程ΔG＞0，說明二者混合未發(fā)生自發(fā)反應，混合體系穩(wěn)定；
　　2.HPLC法檢測發(fā)現(xiàn)：GSI與SGI混合前后HPLC圖譜對比可見GSI吸收峰面積發(fā)生改變；
　　3.外觀及pH值檢測發(fā)現(xiàn)：各配

14、伍注射劑與SGI混合后外觀及pH值于4h內未見明顯變化；
　　4.不溶性微粒檢測發(fā)現(xiàn)：LSI、CSI與SGI配伍后4h內不溶性微?？倲?shù)有增多的趨勢，其中LSI超出了中國藥典規(guī)定；
　　5.滲透壓檢測發(fā)現(xiàn)：LSI、CSI、AI、DI、OI、GSI與等體積的SGI混合后4h內滲透壓未見明顯變化。
　　結論與提示：
　　1.SGI可縮小大鼠心肌梗死面積，降低心肌酶CK、LDH、cTn-I及BNP的含量，保護心肌細胞，抑

15、制心肌損傷，促進心功能恢復正常，對異丙腎上腺素誘導的急性心肌梗死模型大鼠有較好的保護作用；
　　2.SGI可顯著減輕DOX誘導的細胞內鈣超載，且中劑量（0.28μmol/L）和高劑量組（0.48μmol/L）降低細胞鈣離子濃度較低劑量組更明顯。提示SGI的心肌保護作用可能與其減輕細胞內鈣超載作用有關；
　　3.LSI、CSI、AI、OI、GSI與SGI混合可發(fā)生自發(fā)反應，存在配伍風險，臨床應謹慎合用；而DI與SGI混合未發(fā)生

16、自發(fā)反應，存在配伍風險可能性低。
　　綜上所述，本研究進行了SGI對急性心肌梗死的保護作用及與臨床常用注射劑配伍風險評估的研究。研究結果表明SGI可縮小大鼠心肌梗死面積，降低心肌酶CK、LDH、cTn-I及BNP的含量，保護心肌細胞，抑制心肌損傷，促進心功能恢復正常，證實了SGI對急性心肌梗死有較好的保護作用；而且SGI可顯著減輕 DOX誘導的細胞內鈣超載，說明SGI心肌保護作用可能與其減輕心肌細胞內鈣超載作用有關。另外，配伍安全