基于蛋白質(zhì)組學(xué)的注射用血塞通與參麥注射液心肌保護(hù)作用研究.pdf

1、中藥復(fù)方具有多組分、多途徑、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，而蛋白質(zhì)組學(xué)研究具有整體性和全局性的特點(diǎn)，中藥蛋白質(zhì)組學(xué)研究為揭示中藥藥效物質(zhì)及作用機(jī)制提供了有力工具。本研究以注射用血塞通和參麥注射液為研究對象，在整體動物模型上運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)其主要作用途徑，進(jìn)一步在細(xì)胞模型上驗證注射用血塞通和參麥注射液的心肌保護(hù)作用機(jī)制。主要研究內(nèi)容如下:
　　1.在大鼠心肌缺血再灌注損傷模型上，研究發(fā)現(xiàn)注射用血塞通能夠降低血清中CK-MB及LDH含量。運(yùn)

2、用雙向電泳技術(shù)分析心肌組織蛋白質(zhì)組，選取與模型組相比P＜0.05的蛋白點(diǎn)共計18個，制備得到15個進(jìn)行MALDI-TOF-MS/MS鑒定，共鑒定成功14個。合并同一蛋白的不同碎片后，發(fā)現(xiàn)7個顯著差異蛋白。其中缺血心肌中1個蛋白表達(dá)上調(diào)，6個蛋白表達(dá)下調(diào)，注射用血塞通給藥均能回調(diào)其表達(dá)。差異蛋白功能分析發(fā)現(xiàn)，其與改善心肌缺血再灌注過程中丙酮酸脫氫酶(Pyruvate dehydrogenase，PDH)和過氧化物氧化還原酶3等蛋白表達(dá)有關(guān)

3、，提示改善能量代謝障礙及對抗氧化應(yīng)激是注射用血塞通抗心肌缺血再灌注損傷的主要作用途徑。
　　2.采用缺氧/復(fù)氧損傷和氧化損傷心肌細(xì)胞模型，分別從能量代謝和氧化應(yīng)激兩個方面探討注射用血塞通保護(hù)心肌細(xì)胞H9c2的作用機(jī)制。結(jié)果表明，注射用血塞通對缺氧/復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞具有劑量依賴性的保護(hù)作用，并能劑量依賴性地改善缺氧/復(fù)氧損傷導(dǎo)致的PDH活性、Na+-K+-ATPase活性、Ca2+-Mg2+-ATPase活性的降低，阻止ATP和乙

4、酰CoA含量的減少以及丙酮酸累積。Western blot結(jié)果表明缺氧/復(fù)氧損傷后，丙酮酸脫氫酶E1α亞基(Pyruvate dehydrogenase E1 alpha，PDHA1)、ATP合成酶(ATP synthase，H+ transporting，ATP5A)蛋白表達(dá)量減少，注射用血塞通可回調(diào)這兩個蛋白的表達(dá)。在氧化損傷心肌細(xì)胞模型上發(fā)現(xiàn)，注射用血塞通可劑量依賴性地增加細(xì)胞存活率，顯著降低LDH的釋放和MDA含量。研究結(jié)果從細(xì)

5、胞水平驗證了注射用血塞通能夠通過恢復(fù)丙酮酸脫氫酶代謝途徑，并減少LDH釋放和MDA含量，促進(jìn)細(xì)胞能量代謝和對抗氧化應(yīng)激，從而保護(hù)心肌細(xì)胞。
　　3.依據(jù)前期蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果，提示參麥方作用途徑主要是改善能量代謝障礙，因此采用氧化損傷心肌細(xì)胞模型進(jìn)一步研究參麥方的作用途徑。在叔丁基雙氧水損傷心肌細(xì)胞模型上研究發(fā)現(xiàn)，參麥注射液中12個組分具有良好的抗心肌細(xì)胞氧化損傷活性。采用LC-MS技術(shù)推測鑒定出24個潛在的活性化合物。參麥注射液

6、及其藥效物質(zhì)保護(hù)心肌細(xì)胞的作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，參麥注射液預(yù)保護(hù)后能劑量依賴性地改善氧化損傷引起的ATP含量、PDH活性降低和丙酮酸含量增加。麥冬皂苷D、人參皂苷Ro具有同時增加ATP含量、PDH活性以及降低丙酮酸含量的作用，從而改善心肌細(xì)胞的能量代謝障礙，保護(hù)心肌細(xì)胞。
　　綜上所述，本文運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究中藥心肌保護(hù)作用途徑，發(fā)現(xiàn)注射用血塞通可通過改善丙酮酸脫氫酶活性、ATP含量以及降低LDH釋放、MDA含量等途徑保護(hù)心肌細(xì)胞