肝素芐基酯制備及肝素廢水蛋白回收研究.pdf

1、IIII摘要肝素具有良好的抗凝血作用，目前被普遍用于手術(shù)治療過(guò)程和抗靜脈血栓形成等臨床實(shí)踐中，其臨床應(yīng)用價(jià)值是至今任何一種藥物都無(wú)法替代的。其中伊諾肝素鈉是目前研究最廣、循證醫(yī)學(xué)最多、使用最多的肝素類(lèi)藥品，占據(jù)肝素藥物市場(chǎng)份額的50%以上。依諾肝素鈉生產(chǎn)工藝中最關(guān)鍵的是肝素芐基酯制備，其酯化程度的不同，決定了分子量的大小，得率和效益。同時(shí)，在肝素生產(chǎn)中，傳統(tǒng)抗凝血特性的效價(jià)測(cè)定主要依賴(lài)肉眼判斷，試驗(yàn)誤差大；采用國(guó)外試劑則價(jià)格昂貴。一種便

2、于操作，成本較低且客觀(guān)，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好的效價(jià)測(cè)定方法，對(duì)提升中小企業(yè)肝素品質(zhì)控制、降低生產(chǎn)成本、提高生產(chǎn)效益具有重要意義。此外，我國(guó)肝素加工廢水約6000td，肝素在動(dòng)物體內(nèi)多以糖蛋白復(fù)合物的形式存在，生產(chǎn)中要用酶將肝素和蛋白分離，所以廢水為富含氨基酸的高鹽度有機(jī)物，COD值高，味道難聞，對(duì)環(huán)境污染大。但如果能回收廢水中蛋白和有機(jī)物，不僅能減輕或清除環(huán)境污染，且能變廢為寶，具有較好的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)效益。針對(duì)以上情況，本論文主要研究了肝素芐基

3、酯超聲波輔助制備的優(yōu)化；單通道凝血儀和兔全血法測(cè)定肝素鈉效價(jià)；肝素鈉廢水蛋白沉淀回收。1、在肝素芐基酯的制備中：首先利用甲醇純化原料，利用紫外分光度計(jì)和高效液相色譜進(jìn)行了蛋白質(zhì)、核酸和多硫酸軟骨素的檢測(cè)；然后通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，確定了超聲波功率、時(shí)間對(duì)酯化率的影響。最后在此基礎(chǔ)上利用designexpert軟件優(yōu)化設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，得到最佳工藝參數(shù)為：溫度控制在3540度，功率為400W，超聲反應(yīng)時(shí)間5.5h，處理酯化率優(yōu)于對(duì)照樣(反應(yīng)25小時(shí))的

4、酯化率（4.65%），為5.35%，經(jīng)純化蛋白核酸含量明顯降低，原料不含多硫酸軟骨素。2、利用羊血漿活化凝血活酶時(shí)間來(lái)測(cè)定肝素鈉效價(jià)的同時(shí)引入單通道凝血儀，實(shí)現(xiàn)微量、自動(dòng)化操作。同時(shí)與中國(guó)藥典的兔全血法作對(duì)比。均采用中國(guó)藥典生物效價(jià)（3.3）法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算，經(jīng)可行性檢測(cè)證明測(cè)定的樣品效價(jià)PT準(zhǔn)確可行兩種方法的可行限率均符合藥典要求。單通道凝血儀APTT法測(cè)得效價(jià)為90.65IUmg，兔血法測(cè)得效價(jià)為92.96IUmg。3、肝素鈉廢水蛋白

5、沉淀回收的試驗(yàn)中：先初篩蛋白絮凝劑，再通過(guò)單因素試驗(yàn)，確定了絮凝劑FeCl3、膨潤(rùn)土、硅藻土的添加量，pH值對(duì)蛋白沉淀量的影響，在此基礎(chǔ)上，采用BoxBenhnkenDesign（Designexpert.v8.0.6.1）設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn)，得到的較佳工藝參數(shù)為：pH7.5、沉淀劑FeCl30.38%、膨潤(rùn)土1.9%、硅藻土4.25%時(shí)，腸衣肝素廢水蛋白沉淀率達(dá)51.13%，廢水溶液變清澈，COD去除率達(dá)80.94%。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：依諾肝