RHL抑制大鼠肝纖維化及LX2細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、目的：探討賴氨大黃酸(RHL)對(duì)大鼠膽汁淤積性肝纖維化的抑制作用，進(jìn)一步闡明其作用的可能分子機(jī)制；在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上體外培養(yǎng)人肝星形細(xì)胞（HSC）株，探討RHL抑制HSC增殖的可能作用機(jī)制；為RHL防治膽汁淤積性肝纖維化的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1、體內(nèi)試驗(yàn)：（1）隨機(jī)將42只大鼠分為假手術(shù)組、模型組、35 mg·kg-1、70 mg·kg-1RHL治療組、大黃酸組及賴氨酸組，每組7只，采用膽總管結(jié)扎(BDL)手術(shù)建立膽汁淤積

2、性肝纖維化大鼠模型。（2）使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血清中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、總膽汁酸（TBA）、總膽紅素（TBIL）水平。（3）HE染色對(duì)各組大鼠肝臟組織行病理學(xué)檢查；Masson三色染色觀察各組大鼠肝組織纖維組織含量與分布；使用試劑盒通過酶標(biāo)儀測(cè)定各組大鼠肝組織中羥脯氨酸（Hyp）水平；免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)各組大鼠α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)部位。（4）RT-PCR檢測(cè)各組大鼠肝組

3、織中轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）和α-SMA mRNA表達(dá)水平；Western blotting檢測(cè)各組大鼠肝組織中TGF-β1和α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量。2、體外實(shí)驗(yàn)：（1）體外培養(yǎng)HSC-LX2細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分成對(duì)照組、50μmol·l-1、100μmol·l-1和150μmol·l-1 RHL用藥組。（2）采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度的RHL對(duì)HSC-LX2細(xì)胞活化和增殖的抑制作用。（3）Western blotting檢測(cè)用不同

4、濃度的RHL處理48小時(shí)后HSC-LX2細(xì)胞中TGF-β1和α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：1、體內(nèi)試驗(yàn)：（1）與假手術(shù)組比較，模型組大鼠肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞，膽管顯著增生并伴纖維大量增生；Hyp水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），免疫組織化學(xué)染色顯示α-SMA著色于胞膜和胞漿且表達(dá)增多；RT-PCR和Wester

5、n blotting結(jié)果顯示模型組大鼠TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（2）與模型組比較，35、70 mg·kg-1RHL治療組和大黃酸組，大鼠肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；肝臟病理組織學(xué)檢查提示35、70 mg·kg-1RHL治療組和大黃酸組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)尚完整，膽管增生，纖維組織沉積減少；Hyp水平減低，差

6、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；RT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示35、70 mg·kg-1RHL治療組和大黃酸組大鼠TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（3）與大黃酸組比較，35、70 mg·kg-1RHL治療組大鼠肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；肝臟病理組織學(xué)檢查提示35、70 mg·kg-1

7、RHL治療組大鼠肝組織中膽管增生減少，纖維沉積減少；Hyp水平減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；RT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示35、70 mg·kg-1RHL治療組大鼠TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。2、體外實(shí)驗(yàn)：（1）CCK-8結(jié)果顯示，與細(xì)胞對(duì)照組比較，50μmol·l-1、100μmol·l-1和150μmol·l-1 RHL用藥組HSC-LX2

8、細(xì)胞的增殖明顯被抑制，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（2）Western blotting結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，50μmol·l-1、100μmol·l-1、150μmol·l-1 RHL用藥組處理HSC-LX2細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞中TGF-β1和α-SMA蛋白表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1、RHL可減輕膽汁淤積性肝纖維化模型大鼠的肝臟損傷，抑制模型大鼠的肝纖維化進(jìn)程。2、RHL能下調(diào)大鼠細(xì)胞