溫敏性殼聚糖水凝膠對大鼠成骨細胞的毒性研究.pdf

1、研究背景
　　 由創(chuàng)傷、炎癥、腫瘤等各種原因造成的骨不連、骨缺損一直是骨科治療領域的難題，采取何種材料進行骨移植術一直是研究領域的重點。隨著技術的發(fā)展，利用骨組織工程的方法或基因治療的方法修復骨缺損、骨不連引起人們高度重視。
　　 將種子細胞種植于一種生物相容性良好并可被人體逐漸降解吸收的生物材料上，當種子細胞擴增并形成細胞/生物材料結(jié)構(gòu)后，再回植到體內(nèi)，使受損組織得到修復，這是組織工程的常用方法。利用注射的方法，可注射

2、型水凝膠在注射處原位形成生物支架，為細胞提供生存所需的三維空間，同時也減輕了植入方法對周圍組織造成的損傷。
　　 近年來，組織工程用水凝膠生物材料的研制發(fā)展迅速。許多研究表明，殼聚糖水凝膠是一類生物相容性好、可體內(nèi)降解的生物材料，作為組織工程細胞支架具有廣泛的應用前景。目前溫敏性殼聚糖復合軟骨細胞以注射形式修復軟骨缺損有較多研究報道，但溫敏性殼聚糖復合成骨細胞體外構(gòu)建人工骨組織并對骨不連、骨缺損進行微創(chuàng)治療的研究相對缺乏。

3、>　　 目的
　　 觀察成骨細胞在溫敏性殼聚糖水凝膠中的生長情況，驗證溫敏性殼聚糖水凝膠對成骨細胞的毒性，為骨不連、骨缺損微創(chuàng)治療提供依據(jù)。
　　 方法
　　 本實驗首先利用組織塊培養(yǎng)法成功分離并培養(yǎng)出了SD大鼠成骨細胞，并對其進行了組織學鑒定；其次，制備出了具備良好溫敏特性的殼聚糖水凝膠，將溫敏性殼聚糖植入大鼠大腿肌肉中，檢測其組織相容性；并且以溫敏性殼聚糖水凝膠為支架，將成骨細胞復合該支架進行培養(yǎng)，體外構(gòu)建

4、人工骨組織，對其進行顯微鏡下觀察成骨細胞在溫敏性殼聚糖中生存、擴增情況；最后，配制出四種不同濃度的溫敏性殼聚糖水凝膠浸提液，并使用該浸提液進行對成骨細胞的毒性試驗。實驗分為三組即完全培養(yǎng)基組（陰性對照組）、不同濃度溫敏性殼聚糖水凝膠浸提液組（實驗組）、純鉛材料浸提液組（陽性對照組）。用SD大鼠成骨細胞在不同濃度的溫敏性殼聚糖水凝膠浸提液中體外培養(yǎng)24h、48h、72h、96h，用MTT法測定細胞相對增殖率(RGR)，判斷細胞毒性的級別。

5、
　　 結(jié)果
　　 溫敏性殼聚糖植入大鼠大腿肌肉后，逐漸出現(xiàn)炎癥反應，無論是溫敏性殼聚糖降解時間還是炎癥反應消退時間均少于8周；SD大鼠成骨細胞在溫敏性殼聚糖水凝膠中培養(yǎng)24小時內(nèi)鏡下觀察呈圓形，48小時后開始伸出觸角并擴增；在溫敏性殼聚糖水凝膠浸提液中培養(yǎng)的各組細胞在不同時間點相對增殖率均在92％-112％之間，通過分析各組MTT檢測吸光度值，實驗結(jié)果表明，在各個不同的時間點檢測，無論是高濃度的浸提液還是低濃度的浸提液